,记9分。所有患者在入院次日清晨抽空腹血,测定以下生化指标:TC、HDL、LDL、TG、BG、UA。13分子生物学检测
标准DNA提取技术提取外周血DNA,采用如下引物(上海博亚生物技术公司合成)扩增AR基因外显子1区包括多态性区域的一个200,300bp片断。正义引物F:5′GCCGTCCAAGACCTACCGA3′;
f反义引物R:5′GGAGAACCATCCTCACCCT3′。反应条件如下:50μl反应体积扩增约5
gDNA,依次加入5μl10×buffer,400mmol/LdNTPs,15μM/LMgCl2,引物各1μl(引物浓度为10μmol/L),最后加入215U嗜热水生菌(Taq)DNA聚合酶。扩增条件:95℃预变性3mi
后进入循环,℃变性45s,℃退火45s,℃延伸40s,个循环后,℃再延伸5mi
。9455723572产物用2琼脂糖凝胶100V电压电泳40mi
,在自动凝胶成像仪上观察并照相,见图1。纯化PCR产物(WizardDNAclea
upsystem)并在上海博亚生物公司(采用ABI377,测序仪,流程按照厂家说明)测序,确定重复序列的长度。每个样本重复两次以上。14统计分析
除非特别说明,图表中数据以均数±标准差(x±s)表示,双侧P<0105有统计学意义,根据需要分别采用单变量相关分析、多元逐步回归分析、x2检验,正态分布资料采用t检验、必要时采用MW非参数检验。采用SPSS1010统计软件分析。221结果CAG重复长度和次数
CAG重复长度为13,30次,平均2118次,分布见图1。CAG重复次数上四分位数为≥24,定义为长AR基因组(30例)<24次者定义为短AR基因组,(95例)。22CAG重复序列长度与CAD危险因素的相关性具有较短重复序列者BMI显著低于具有长重复序列者(t31024,P01005);长AR组具有较高的HDL水平,差异显著(t21610,P01010)。相关分析表明,CAG重复序列长度和HDL水平正相关,相关关系独立于BMI、年龄、吸烟和血糖水平等因素以外(偏相关系数r01246,P01003)。尿酸水平在长AR组中较高,但是分析表明考虑BMI因素后这种相关性变得不显著。CAG长度和年龄、糖尿病、糖尿病家族史、早发CHD家族史或者吸烟之间没有发现内在相关性,平均血糖水平和其他生化参数在两者之间也没有发现显著差异。23AR基因片断CAG重复序列长度在CAD病变的广度方面的研究
将患者分组为冠脉有显著狭窄组(1,3支病变组)和无明显狭窄组,结果发现,短AR基因者具有多支病变的几率显著高于长AR基因组:1,3支病变组:短7914,长2016;无狭窄组:短5516r