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f液合并,空干燥,液合并,10000rmi
离心10mi
,弃上清液,下层液体真空干燥,TLCHPECELSD,弃上清液,下层液体真空干燥分析。分析。122解脂假丝酵母自溶条件1221自溶时间:自溶时间:将解脂假丝酵母湿细胞加3倍蒸馏水WW)制成悬液,()制成悬液,2NNa0H用小时提取神经酰胺,测定其含量。调PH5560℃自溶81624小时提取神经酰胺,测定其含量。℃1222自溶温度:将解脂假丝酵母湿细胞加3倍蒸馏水(WW)制成菌悬液,用2N自溶温度:倍蒸馏水()制成菌悬液,NaOH调PH55,分别在505560℃条件下自溶24小时,提取神经酰胺,测定其含,℃小时,提取神经酰胺,量。1223PH被蒸馏水WW制成菌悬液,分别用2N制成菌悬液,将解脂假丝酵母湿细胞加3被蒸馏水制成菌悬液
NaOH和01MHCI调PH455580,60℃的条件下自溶24小时,小时,提取神经酰胺,,在℃提取神经酰胺,测定其含量。测定其含量。2分析方法分析方法21神经酰胺的定性TLC法:将样品溶于不同的氯仿中,取20uI样品上样。展开神经酰胺的定性将样品溶于不同的氯仿中,样品上样。展开后的硅胶板用硫酸铜溶液显色,剂为氯仿19::甲醇09::冰乙酸01,,展开后的硅胶板用硫酸铜溶液显色,晾干后160℃℃烘20mi
。。22神经酰胺的定量:高效液相色谱蒸发光散射法(HPLCELSD)此仪器为美国神经酰胺的定量:高效液相色谱蒸发光散射法蒸发光散射法(。此仪器为美国)。的TSP公司的SpectraSystemP2000检测器采用了蒸发光散射检测器Sedex75型检测器采用了蒸发光散射检测器,检测器温度℃(Sedere法国)检测器温度40℃,空气压力3510次方Pa,检测灵敏度为8色谱法,,色谱美国)柱为AIItimaCN柱(5uI46mm250mmAIItech美国)洗脱剂为正己烷99:乙醇1,:,为参数做出双对数曲线,流速10mImi
。定量分析时以样标浓度C和样品峰面积A为参数做出双对数曲线,。对神经酰胺进行定量。对神经酰胺进行定量。3结果结果
f在PH为80,自溶温度为50℃,自溶24h,神经酰胺含量最高。,℃,神经酰胺含量最高。酵母中含有4种蛋白酶中3种酶的最适作用温度为5060摄氏度,35℃以下不利于摄氏度,℃蛋白酶发挥作用,而且自溶过程中容易发生腐败变质,温度过高,会使酶失活。蛋白酶发挥作用,而且自溶过程中容易发生腐败变质,温度过高,会使酶失活。因此,50℃时神经酰胺含量最高,在此温度下,酵母细胞死亡,各类细胞酶原被激活,℃时神经酰胺含量最高,在此温度下,酵母细r
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