还要跑胶看看28s、18s、5s的三条带是不是清晰，一般质量好的RNA，28s18s的亮度比例在21左右，最后一条5s的应该比较淡。
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fＰＣＲ技术
业精于勤而荒于嬉行成于思而毁于随
②逆转录RT（cDNA：一周内20℃保存，长期70℃保存）
RT反应体系：20ul体系第一步：约20分钟RNA抽提物Radome引物RNAsi
1、65℃15分钟2、立即放入冰浴
5μl2μl05μl
第二步：约2小时
RNAsi

05μl
10mMdNTP
1μl
5×RT缓冲液
4μl
25mMMgCl2AMV
4μl3μl
1、37℃15小时
2、94℃510分钟
3、反应物保存于20℃或进行PCR
③聚合酶链反应PCR产物20℃保存
PCR反应体系：100μl体系
约45小时
约5小时
25mMMgCl2
2μl
3μl
10×PCR缓冲液
5μl
5μl
10mMdNTP
1μl
1μl
10pmolμl上游引物
25μl
25μl
10pmolμl下游引物
25μl
25μl
cDNA模板
25μl
5μl
ddH2O
34μl
30μl
Taq酶
05μl
1μl
轻质石蜡油
50μl
50μl
1、94℃2分钟，55℃1分钟，72℃2分钟为第一个步1个循环
2、94℃45秒，55℃40秒，72℃1分钟为第二步3040个循环
3、72℃10分钟
4、取出后4℃保存，5分钟后20℃保存或走电泳
④琼脂糖凝胶电泳：约125小时
1、配制05×TBE电泳缓冲液300ml2、配制凝胶浓度17（40ml05×TBE加068g胶），微波炉中火2分钟溶解胶，冷却至60℃加入溴乙锭2μl（10mgml的终浓度05μgml），充分混匀
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业精于勤而荒于嬉
3、将温热的凝胶倒入已置好梳子的胶膜中，在室温下放置3045mi
后现进行电泳4、加样8μlPCR反应产物2μl溴酚兰，空一格加DNAmarker5、电泳5080V，电场强度不宜高于5Vcm6、在紫外灯下观察DNA存在则显示出红色荧光条带采用凝胶成像系统拍照保存。
行成于思而毁于随
电泳缓冲液5×TBE贮存液：Tris54g、硼酸275g、05MEDTA20mlpH80、加蒸溜水至1000ml。使用时，将5×TBE稀释10倍成05×TBE就可以在电泳时使用工作浓度。
上样缓冲液6×缓冲液，4℃保存：025溴酚蓝、025二甲苯青FF、30甘油
琼脂糖凝胶配制：（10）10g琼脂糖100ml电泳缓冲液，微波炉加热至沸腾如果首次煮胶，一定要煮透，以不出现泡沫为标志，熔化的琼脂物冷却至60℃时加入10mgml溴化乙锭5μl，充分混匀，将温热的凝胶倒入已置好梳子的胶膜中，在室温下放置3045mi
可以放入4度冰箱加快琼脂糖凝固后现进行电泳。15同上，将琼脂糖的量改为15g。
试剂：
1、DEPC水：吸出1mlDEPCr