一、抗体纯化部分1、腹水血清的亚型测定完成后，IgG亚型的腹水血清使用Protei
G抗体纯化柱纯化；IgM亚型的腹水血清则使用饱和硫酸铵沉淀法沉淀。11Protei
G抗体纯化步骤：（1）新柱子先用DDW5ml过柱；（2）10倍柱体积的Bi
di
gBufferpH70平衡纯化小柱；（3）抗体过柱，过程中要求缓慢过柱，以求抗体蛋白更好的结合在结合位点上；（4）继续10倍柱体积的Bi
di
gBufferpH70平衡纯化小柱；（5）5倍柱体积甘氨酸盐酸缓冲液（pH27）洗脱结合位点上的抗体，并加入TrisHCIpH90中和甘氨酸，使pH保持为适合抗体保存的中性；（6）10倍柱体积的Bi
di
gBufferpH70平衡纯化小柱；（7）5倍柱体积20乙醇溶液过柱，于4℃条件下保存纯化小柱；（8）将洗脱的抗体用聚乙二醇浓缩并透析，以彻底去除不相干离子。其中所用试剂配方：DDW：超纯水Bi
di
gBuffer（100ml）：A液，02M磷酸氢二钠61mlB液，02M磷酸二氢钠39ml磷酸氢二钠437g磷酸二氢钠122g甘氨酸盐酸缓冲液：01M甘氨酸溶液加浓盐酸调pH27TrisHCL缓冲液：1MTris溶液加浓盐酸调pH9012饱和硫酸铵沉淀法步骤：（1）配制饱和硫酸铵溶液，再用氨水调节pH至85（2）沉淀：a、腹水血清离心去除细胞碎片，保留上清液并测定体积；b、边搅拌边逐滴滴入等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀；c、上述蛋白质溶液经过离心弃上清取沉淀，并用PBS溶液（pH70）溶解；d、继续向上一步蛋白溶液中滴入12体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀使蛋白充分沉淀；e、继续离心沉淀弃上清去沉淀，用PBS溶液（pH70）溶解；（3）透析：每隔36小时换一次透析液，以彻底去除硫酸铵。其中所用试剂配方：PBS缓冲液（1LpH70）：氯化钾02g磷酸二氢钾02g磷酸氢二钠335g氯化钠8g
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