过C18固相萃取柱。具体步骤是：80甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100甲醇（5ml）洗柱→100乙醚（5ml）洗柱→100甲醇（5ml）洗柱→循环。（4）将过柱后的样品转入5ml塑料离心管中，真空浓缩干燥或用氮气吹干，除去提取液中的甲醇，用样品稀释液定容（一般1g鲜重用2ml左右样品稀释液定容，测定不同激素时还要稀释适当的倍数再加样）。2．样品测定（本指南所用的量是按一块96孔板计算的）竞争：即加标准物、待测样和抗体。加标样及待测样：取适量所给标样稀释配成：ABA的最大浓度为500
gmlIAAZR标准曲线的最大浓度为100
gmlGA的最大浓度为10
gml，JAME的最大浓度为200
gml。然后再依次2倍稀释8个浓度（包括0
gml）。将系列标准样加入96孔酶标板的前两行，每个浓度加2孔，每孔50μl其余孔加待测样，每个样品重复两孔，每孔50μl。加抗体：5ml样品稀释液中加入一定量的抗体在（最适稀释倍数见试剂盒标签如稀释倍数是1：2000，就要加25μl的抗体）混匀后每孔加50μl，然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。竞争条件37℃左右05h。洗板：将反应液甩干并在报纸上拍净。第一次加入洗涤液后要立即甩掉。然后再接着加第二次。共洗涤四次。加二抗：将适当的酶标二抗，加入10ml样品稀释液中（比如稀释倍数11000就加10μl），混匀后，在酶标板每孔加100μl，然后将其放入湿盒内，置37℃下，温育05h。洗板：方法同竞争之后的洗板。加底物显色：称取1020mg邻苯二胺（OPD）溶于10ml底物缓冲液中（小心勿用手接触OPD），完全溶解后加4μl30H202。混匀，在每孔中加100μl，然后放入湿盒内，当显色适当后（肉眼能看出标准曲线有颜色梯度，且100
gml孔颜色还较浅），每孔加入50μl2molL硫酸终止反应。比色：在酶联免疫分光光度计上依次测定标准物各浓度和各样品490
m处的OD值。结果计算：用于ELISA结果计算最方便的是logit曲线。曲线的横坐标用激素标样各浓度（
gml）的自然对数表示，纵坐标用各浓度显色值的logit值表示。Logit值的计算方法如下：BB0BLogit（BB0）l
l
1BB0B0B其中B0是0
gml孔的显色值，B是其它浓度的显色值。待测样品可根据其显色值的logit值从图上查出其所含激素浓度（
gml）的自然对数，再经过反对数即可知其激素的浓度（
gml）。求得样品中激素的浓度后，再计算样品中激素的含量（
gg。fw）
湿盒（容器内加湿纱布或泡沫塑料）
f生产商朗盛产地德国产品名称2，6－二叔丁基对甲苯酚化学结构式分子r