植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）
免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。由于酶联免疫吸附分析法（E
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tAssays简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。目前，几大类植物激素IAAABAGA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式，一种是在固相载体上包被抗体（直接法），另一种是包被抗原（间接法）。直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。间接法的原理可用下式表示：AbHHPAbHAbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。
材料、试剂及设备
1材料各种新鲜植物材料2仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl200μl1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。3试剂1磷酸盐缓冲液（PBS）：称取80gNaCl02gKH2PO4加1000ml蒸馏水，pH为75。2样品稀释液：500mlPBS中加05mlTwee
20，05g明胶（稍加热溶解）。3底物缓冲液：称取510gC6H8O7H2O（柠檬酸）1843gNa2HPO412H2O，用量筒加1000ml，蒸馏水，再加1mlTwee
20，pH为50。4洗涤液：1000mlPBS加1mlTwee
20。5终止液：2molLH2SO4。6提取液：80％甲醇，内含1mmolLBHT二叔丁基对甲苯酚，为抗氧化剂，先用甲醇溶解BHT，再配成80的浓度。296gNa2HPO412H2O，用量筒
操作步骤
1．样品中激素的提取（1）称取0510g新鲜植物材料（若取样后材料不能马上测定，用液氮速冻半小时后，保存在20℃的冰箱中），加2ml样品提取液，在冰浴下研磨成匀浆，转入10ml试管，再用2ml提取液分次
f将研钵冲洗干净，一并转入试管中，摇匀后放置在4℃冰箱中。（2）4℃下提取4h，3500转mi
离心8mi
取上清液。沉淀中加1ml提取液，搅匀，置4℃下再提取1h，离心，合并上清液并记录体积，残渣弃去。（3）上清液r