仪器设备1、2、3、4、
医用微波炉；水浴锅；OLYMPUSBX51荧光显微镜；OLYMPUSDP11数字显微照相机。
FISH试剂（1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃；（2）20×SSC（pH70）；（3）2×SSC，由20×SSC溶液稀释而成；（4）25mgml蛋白酶K消化液。（5）变性液70％甲酰胺2×SSC，pH70：4ml20×SSC；8ml蒸馏水；28ml甲酰胺。每次新鲜配制。（6）杂交后洗涤液：20×SSC4ml；蒸馏水16ml；甲酰胺20ml。每次新鲜配制。调节pH前升至室温。实验步骤1、脱蜡：1）二甲苯脱蜡3次，每次5mi
；2）100％酒精两次，每次2mi
；3）移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。2、蛋白酶处理1）每个染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC40ml倒人Facal管，在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内，摇动直到酶溶解。2）37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20mi
。3）×SSC在室温下漂洗切片3次，每次1mi
。4）梯度酒精脱水（20℃预冷）。3、变性：1）每一个立式染色缸配制40ml变性溶液；2）78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸；3）78℃孵育8mi
；4）即移入20℃预冷70酒精的染色缸内2mi
，再依次移入80、90和100的20℃预冷酒精内，每缸2mi
；5）空气干燥。4、杂交：1）准备探针；2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；3）滴10l探针在切片的组织上，加盖玻片；4）盖上湿盒盖，37℃孵育12h～16h。杂交后的水洗：5）镊子小心去除盖玻片；6）43℃预热杂交后水洗溶液40ml水洗切片15mi
；7）2×SSC37℃洗两次，每次10mi
；8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。检测：9）从1×PBS中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。把切片放入湿盒内，同时处理4张切片。
f10）每张切片使用30l～60l罗丹明抗地高辛抗体或FITC卵白素，室温下孵育20mi
；11）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2mi
。扩增：12）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；13）每张切片滴30l～60l抗卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20mi
；14）去掉塑料盖膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2mi
；15）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；16）每张切片滴30l～60l抗卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20mi
；17）1×PBS室温下洗3次，每次2mi
。5、细胞核染色：1）张切片加10l～20lDAPI，覆盖盖玻片并在室温下孵育2～5ml；2）尽可能快的在荧光显微镜下观察或封闭盒内保存在20℃冰箱。切片在染色之后1h内可以在显微镜下观察r