化形成愈伤组织,作为受体细胞,最终培育形成转基因水稻。(1)获取目的基因的方法有三种:①从基因文库中获取②利用PCR技术扩增③人工合成(化学合成),已知铁结合蛋白基因(目的基因)来自菜豆,且基因的脱氧核苷酸序列已知,则可以用化学合成法获得,也可以利用PCR技术对该基因进行扩增。
f(2)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体。(3)构建重组质粒的过程中,通常要用同一种限制酶分别切割质粒和含目的基因的DNA片段,使它们产生相同的黏性末端,然后再用DNA连接酶连接成重组质粒。将重组Ti质粒转入农杆菌时,可以用CaCl2溶液处理农杆菌,使农杆菌属于感受态,便于重组Ti质粒导入。(4)质粒上的标记基因为潮霉素抗性基因,因此通过培养基2的筛选培养,可以获得含有重组质粒的愈伤组织。培养基3与培养基2的培养目的不同,两者的主要区别是生长素和细胞分裂素的浓度比例。该基因工程的目的基因为铁结合蛋白基因,因此检测培育转基因水稻的目的是否达到,需要检测转基因水稻种子中铁含量。
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