过滤时,蛋白质分子越小,洗脱速度越慢,而在SDSPAGE中,蛋白质分子越小,迁移速度越快?答凝胶过滤时,凝胶颗粒排阻Mr较大的蛋白质,仅允许Mr较小的蛋白质进入颗粒内部,所以Mr较大的蛋白质只能在凝胶颗粒之间的空隙中通过,可以用较小体积的洗脱液从层析柱中洗脱出来。而Mr小的蛋白质必须用较大体积的洗脱液才能从层析柱中洗脱出来。SDSPAGE分离蛋白质时,所有的蛋白质均要从凝胶的网孔中穿过,蛋白质的相对分子质量越小,受到的阻力也越小,移动速度就越快。
(六)问答题及计算题(解题要点)
1.怎样证明酶是蛋白质?1.答:(1)酶能被酸、碱及蛋白酶水解,水解的最终产物都是氨基酸,证明酶是由氨基酸组成的。(2)酶具有蛋白质所具有的颜色反应,如双缩脲反应、茚三酮反应、米伦反应、乙醛酸反应。(3)一切能使蛋白质变性的因素,如热、酸碱、紫外线等,同样可以使酶变性失活。
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f(4)酶同样具有蛋白质所具有的大分子性质,如不能通过半透膜、可以电泳等。(5)酶同其他蛋白质一样是两性电解质,并有一定的等电点。总之,酶是由氨基酸组成的,与其他已知的蛋白质有着相同的理化性质,所以酶的化学本质是蛋白质。2.简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其个性?2.答:(1)共性:用量少而催化效率高;仅能改变化学反应的速度,不改变化学反应的平衡点,酶本身在化学反应前后也不改变;可降低化学反应的活化能。(2)个性:酶作为生物催化剂的特点是催化效率更高,具有高度的专一性,容易失活,活力受条件的调节控制,活力与辅助因子有关。3.试指出下列每种酶具有哪种类型的专一性?(1)脲酶(只催化尿素NH2CONH2的水解,但不能作用于NH2CONHCH3);(2)βD葡萄糖苷酶(只作用于βD葡萄糖形成的各种糖甘,但不能作用于其他的糖苷,例如果糖苷);(3)酯酶(作用于R1COOR2的水解反应);(4)L氨基酸氧化酶(只作用于L氨基酸,而不能作用于D氨基酸);(5)反丁烯二酸水合酶只作用于反丁烯二酸(延胡索酸),而不能作用于顺丁烯二酸(马来酸);(6)甘油激酶(催化甘油磷酸化,生成甘油1磷酸)。3.答:(1)绝对专一性;(2)相对专一性(族专一性)(3)相对专一性(键专一性);;(4)立体专一性(旋光异构专一性)(5)立体专一性(顺反异构专一性)(6)立体专一性(识别;;从化学角度看完全对称的两个基团)。4.称取10mg蛋白酶配成10mL溶液,取2mL溶液测得含蛋白氮02mg,另取01mL溶液测酶活r