菌在压力为100kPa
温度为121℃的条件下灭菌15
30mi
培养基及容器的灭菌
大肠杆菌的纯化培养
自读教材夯基础
1制备固体培养基
f2纯化大肠杆菌
1方法
①平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。
2鉴定将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_℃恒温箱中培养12h和24h后分别记录观察。
3菌种保存
对于频繁使用的菌种可以采用临时保藏法对于需要长期保存的菌种可以采用甘油管藏法。
1培养基灭菌后需要冷却到50℃左右时才能用来倒平板你用什么办法来估计培养基的温度
提示可以用手触摸感觉上以刚不烫手为准。
2如果需要调节培养基的pH应在哪一步骤后进行
提示溶化后灭菌前。
3在用平板划线法接种大肠杆菌时第一次划线前、每次划线前及划线操作结束后都要灼烧接种环请分析其目的分别是什么。
提示
第一次灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧
目的避免接种环上可能存在的
微生物污染培养物
杀死上次划线结束后接种
环上残留的微生物使每
次划线的微生物来自上次
划线末端
杀死接种环上残留的菌
种避免细菌污染环境和
感染操作者
提示将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放在37℃恒温箱中培养观察并记录结果。
跟随名师解疑难
1微生物培养中有关实验操作的注意事项
1倒平板操作
①培养基灭菌后需冷却至50℃左右时才能倒平板原因是琼脂在44℃以下凝固。
②培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙不要完全打开。
③整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行避免杂菌污染。
f④平板冷凝后要倒置的原因防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基造成污染。
⑤若倒平板时培养基溅在皿盖和皿底之间的部位这个平板应丢弃。
2平板划线操作
①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌划线操作结束仍需灼烧接种环。
②灼烧接种环之后要等其冷却后才能伸入菌液以免温度太高杀死菌种。
③划线时最后一区域不要与第一区域相连。
④划线用力要大小适当防止用力过大将培养基划破。
2稀释涂布平板操作
1稀释操作时每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌操作时试管口和移液管应在离火焰12cm处。
2涂布平板时稀释涂布平板的操作比较复杂且各个细节均需保证“无菌”应特别注意
①酒精灯与培养皿的距离要合适。
②吸管头不要接触任何其他物体。
③吸管要在酒精灯火焰周围使用。
3平板划线法和r