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。225ARDRA(扩增DNA限制性分析技术)
ARDRA即扩增DNA限制性分析技术,其原理是用限制性酶切扩增DNA产物,得到含细菌遗传信息的特异性图谱。ARDRA分辨率依赖所使用的限制性内切酶和所扩增的DNA长度而定,可鉴别细菌到种或亚种水平。此技术重复性较好,但其分辨率不及RPAD。226RAPD(随机扩增多态性DNA技术)
随机扩增多态性DNA技术RAPD是以PCR为基础的分子标志技术。它是根据PCR原理以人工随机合成的寡核苷酸为引物对研究对象的基因组DNA进行扩增扩增出的不同片段经琼脂糖凝胶电泳后呈现出一定形式的谱带DNA指纹图谱。由于RAPD在分析DNA多态性方面具有快速简便等特点因此广泛地应用于微生物菌种的分子分类与鉴定。23PCR相关技术
PCR(聚合酶链反应)是基于天然DNA复制规律而设计的一种特异性DNA靶序列体外扩增方法。由PCR反应直接扩增DNA是一种最简单最直接的检测特殊序列的方法。目前已建立了应用PCR方法检测多种致病菌及病毒的方法,如志贺氏菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、甲肝病毒等的快速检测。近年来,国内外不少学者先后将PCR法应用于双歧杆菌的鉴定并取得了长足的进展。231实时PCR(realtimePCR)
实时PCR又称荧光定量PCR或TaqMa
PCR,是在常规PCR基础上运用荧光能量传递(FRET)技术,加入荧光标记探针,巧妙把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起,借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数,做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数,CT值越小,模版DNA的起始拷贝数越小。因此,利用CT值确定DNA拷贝数的实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确。且与普通PCR相比,实时PCR分析更快,更准确,偏差更小,重现性更好。232多重PCR
多重PCRmultiplexPCR,又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理、反应试剂
f和操作过程与一般PCR相同。多重PCR可在同一PCR反应管内同时检出多种微生物,或对有多个型别的目的基因进行分型,适宜于微生物区系的检测,如人肠道微生物的同时侦检。233RepPCR细菌基因组重复序列PCR
RepPCR即细菌基因组重复序列PCR技术(repPCR),是扩增细菌基因组中广泛分布的短重复序列,通过电泳条带比较分析,来揭示基因组间的差异。细菌基因组中广泛分布的短重复序列(r
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