浓度分别为:100
gml,500
gml,1ugml。但要注意,DEPC灭活后的副产品,对有些后续实验是有影响的。我也来谈谈RNA的提取,我觉得14楼说的方法很严格,但是有时候我们其实不必在过多的细节上太紧张。而在有些步骤一定要小心了。以下的内容,是讲给那些既想偷懒,有希望实验结果有保证的人听的,如果你是习惯于每一步都很严格的人的话,建议还是按照14楼的方法做,因为那样才是正途啊。
好了,下面是给想偷懒,但又不想搞砸实验的战友看的。用最少的时间,Mo
ey,力气,来做出最好的结果,是我们的终极目标(PS:我相信一句话,懒人推动科技进步!个人愚见,大家不要拍我啊)。我是做植物的,所以以植物RNA提取为例子:一、关于器皿的处理:
枪头ep管最好是用DEPC处理一下,当然如果老板钱多的话,尽管用进口的RNaseFree的吧。这里,如果你想要偷点懒,也是有办法的,就是少处理一些ep管,因为后面我们会讲到,不是所有的ep管都一定要处理的。
研钵,这个东西按要求是要高温干燥处理的,但是在实际实验中,如果你不处理的话,也不会有太大的影响。因为在一般我们要处理的材料上都会带有很多的RNA酶,设想一下,一个研磨碎了的细胞会释放多少RNA酶出来。所以,在研钵上残留的那些RNase,不是导致你RAN降解的原因。我的做法是,洗干净的研钵,和枪头等一起湿热灭菌即可。如果你真的很急的话,连湿热灭菌也免了。
关于手套、口罩和实验台。手套是一个很重要的东西,这个千万不能省,而且实验过程当中要勤换手套。因为,一般我们在做实验是时候,还要取用很多其他试剂、仪器。所以手套往往是最有可能污染你样品的东西。所以千万记得要换得勤快点。还有,顺便说一下,最好是戴两层PE手套,因为实验过程中,往往手上会出汗,戴一层手套的话,往往脱下来,就很难戴上去了。戴上两层,外层的手套可以方便更换,免得戴不上,还把PE手套夹到ep管里面,这样可是很危险的!至于口罩,我认为,不戴也没关系,但不戴口罩的话,建议你少说些话了,尤其是不要对这样品。讲话是时候,带出去的口水,足够降解你的样品了。工作台的话,我想,能在一个超净台上是最好,普通的be
ch也可以,但是要保证周围没人干扰,否则,有人冲你打个招呼,那喷过来的口水就够让你的RNA嗝屁了(像口水兵?)。二、关于实验过程和试剂
通常,提取植物RNA的方法如下试剂:Trizol,氯仿,75%乙醇,异丙醇,DEPC水;操作:
1)、每100mg组织加1mlTRIZOL试剂,用液氮匀浆后,室温放置到r