RNA提取心得经验体会纪律（RNA提取注意事项）！
纪律一：杜绝外源酶的污染。注意一：操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。注意二：实验所涉及的离心管，Tip头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要
彻底处理。注意三：实验所涉及的试剂溶液，尤其是水，必须确保RNaseFree。
纪律二：阻止内源酶的活性注意四：选择合适的匀浆方法。注意五：选择合适的裂解液。注意六：控制好样品的起始量。
纪律三：明确自己的抽提目的注意七：任何裂解液系统在接近样品最大起始量时，抽提成功率急剧下降。注意八：RNA抽提成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功，而不是得
率。
R
ase污染的10大来源
1：手指头手指头是外源酶的第一来源，所以必需戴手套并且频繁更换。另外，口罩也必需戴，因为呼吸也是一个重要的酶来源。戴手套口罩的另外的好处是保护实验人员。2：枪头，离心管，移液器单纯的灭菌是不能灭活R
ase的，所以枪头和离心管要用DEPC处理，即使是标明为DEPC处理过的。移液器最好是专用的，用前用75的酒精棉球搽拭干净，尤其是杆子；另外，一定不要使用褪头器。3：水缓冲液一定要确保无R
ase污染。4：实验台面最起码要用75的酒精棉球搽拭干净。5：内源R
ase所有组织均含内源酶，故组织用液氮速冻是降低降解的最好办法。液氮保存碾磨方法的确不方便，但对有一些内源酶含量很高的组织，却是唯一的办法。6：RNA样品RNA抽提产物可能都会含痕量的R
ase污染。7：质粒抽提质粒抽提往往用到R
ase降解RNA，残留的R
ase要用Protei
aseK消化，PCI抽提。8：RNA保存即使低温保存，痕量的R
ase亦会导致RNA降解。长期保存RNA的最好办法是盐醇悬液，因为醇在低温时抑制所有的酶活性。9：阳离子CaMg在含这些离子时，80C加热5分钟会导致RNA被剪切，故如果RNA需要被加热，保存液需要含螯合剂1mMSodiumCitratepH64。10：后续实验所用的酶酶均有可能被R
ase污染。
RNase和DEPC处理
1：高压灭菌是可以灭活部分R
aseA的。实验证明：37C与RNA反应，没有灭菌的PBS，活性点为100pgml；灭菌后，活性点为100
gml。当然，灭菌后R
ase仍然不能认为没有残留。
1
f2：DEPC在水中半衰期为30分钟。01的DEPC灭菌15分钟可以认为彻底破坏了DEPC。破坏后可以闻到一点气味。3：在1MTris1MHEPES1MMOPS中分别加入1ugmlR
aseA和01及1DEPC实验。结果提示，01DEPC只对MOPS有效，而1DEPC对三种试剂都有效。4：001DEPC，01DEPC，1DEPC有效去除R
aseA的r