清总蛋白进行批内重复性试验、回收试验以及线性范围评价试验,从而评价双缩尿法测定血清总蛋白的精密度、准确度和线性范围。1材料和方法11材料111仪器分光光度计112试剂配制双缩脲试剂的基本试剂有NaOH、硫酸铜结晶、酒石酸钾钠、碘化钾。30gL蛋白质标准液60gL蛋白质标准液,150gL蛋白质标准液,待测血清标本,蒸馏水。12方法121批内重复性试验1211取13支试管分别标记空白管1支标准管2支测定管10支按表1添加试剂。表1试剂添加加入物(ml)空白管标准管×2测定管×10蒸馏水00630gL蛋白标准液006待测样品006双缩脲试剂333充分混匀,37℃水浴10mi
或室温放置30mi
,在波长540
m处比色,以空白管调零,测定各管吸光度。1212结果记录和处理待测样品浓度:血清蛋白质gLA测A标×30平均值:SD∑Si2Si2∑Xix2
1,CVSD÷x×100表2双缩脲法重复性实验测定蛋白总浓度管号标准管吸光度标准管平均吸光度10136014220148
管号12345678910待测管吸光度0139014301380147014801470140014201450145蛋白质浓度gl5873604258316211625462115915600061276127平均浓度gl6059方差205变异系数2361213讨论评价批内重复试验测得数据的平均蛋白浓度为6059gl方差SD为205变异系数CV为23625,实验表明,双缩脲法测定血清总蛋白质的精密度可接受。122回收试验1221样品制备基础样品:待测样品045mL蒸馏水015mL回收样品1:待测样品045mL150gL蛋白溶液005mL蒸馏水01mL
f回收样品2:待测样品045mL150gL蛋白溶液01mL蒸馏水005mL回收样品3:待测样品045mL150gL蛋白溶液015mL1222取10支试管,分别标记空白管1支,标准管1支,样品管8支,样品管每个样品做2管,取平均值,按表3添加试剂。表3添加试剂试剂mL空白管标准管样品管蒸馏水006150gL蛋白溶液006样品006双缩脲试剂333混匀后37℃水浴10分钟或室温放置30分钟,540
m波长比色,空白管调零。1223结果记录和处理加入浓度gL150×回收样品中加入的150蛋白溶液体积06回收浓度回收样品测得浓度基础样品测得浓度回收率回收浓度加入浓度×100表4蛋白质测定的回收试验结果(gl)吸光度测定浓度测定1测定2测定1测定2平均浓度加入浓度回收浓度回收率标准管01170147基础样品00540055276922452507回收样品10087008844623592402712501520122回收样品20112010557444286501525002508100回收样品301260134r