血管紧张素Ⅱ对人肺微血管内皮细胞核因子－ｋＢ的活化作用
摘要目的探讨不同浓度血管紧张素ⅡA
gⅡ在不同时间点对人肺微血管内皮细胞HPMEC核因子－KBNFKB的活化作用。方法采用原代培养的HPMEC，分别以浓度为lO8、107、106、105moLL1的A
gⅡ刺激HPMEC0、05、1、2、4h，用凝胶电泳迁移率实验EMSA观察NFKB对DNA的结合活性。结果各浓度组A
gⅡ均能活化HPMEc中NFKB；与0h比较，A
gⅡ108molL1组在4h表现出明显的NFkB活化作用P＜005，A
gⅡ107mo1L1组在1h开始活化NFKBP＜005，随后各时间点的效应逐渐增强；A
gⅡ106molL1组在1h开始活化NFKB与oh比较，P＜005，2h时达到高峰与1h比较，P＜005，4h活化水平下降与2h比较，P＜005；A
gⅡ105molL1组在05h即明显活化NFKB与0h比较，P＜005，随后各时间点NFKB活化效应逐渐减弱。结论A
gⅡ刺激HPMEc后能引起NFkB活性增加，这可能是A
gⅡ促炎作用的重要环节。
关键词血管紧张素Ⅱ；人肺微血管内皮细胞；核因子kB
血管紧张素ⅡA
gⅡ能启动一系列信号级联反应，在炎症基因转录、炎症因子表达中起着重要作用。有文献报道，A
gⅡ参与了急性肺损伤ALl和急性呼吸窘迫综合征ARDS的病理生理过程。核因子KBNFKB在多种肺部炎症疾病和肺损伤中均存在着活化现象，是启动、放大和延续肺部炎症反应过程中的关键性转录因子。本实验通过细胞实验的方法，研究不同浓度A
gⅡ在各个时间点对人肺微血管内皮细胞NFKB的活化作用，进一步探索A
gⅡ的促炎机制。
1
材料和方法
11
材料
111司。
细胞来源
原代人肺微血管内皮细胞HPMEC购自美国Scie
cell公
112主要试剂及仪器内皮细胞培养基ECM、胰酶EDTA消化液、胰酶消化终止液scie
cell，美国，A
gA
aspec，美国凝胶迁移电泳分析试剂盒Pro．mega，美国，γ32PATP北京福瑞生物工程公司，哺乳动物细胞核蛋白抽提试剂盒上海申能博彩生物科技有限公司，电泳仪和垂直电泳槽北京六一电泳仪器厂。
f12
实验方法
121细胞培养在37度、5％CO2培养箱中培养原代HPMEC，待细胞生长融合80％后用胰酶消化液传代1次，方法参照美国Scie
cell公司产品说明书。实验用细胞为培养46代的HPMEC。
122实验分组及处理细胞生长融合80％后，弃去培养基，换无血清ECM培养基培养24h进行实验。实验分为5组：A
gⅡ108、A
gⅡ107、A
gⅡ106、A
gⅡ105molL1浓度组和对照组。以不同浓度的A
gⅡ刺激HPMECO、05、1、2、4h后提取细胞核蛋白，其中对照组0h组加入等量无血清ECM。各组实r