石蜡组织切片技术
步骤:杀死与取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡与包埋、切片与贴片、染色、封固等。(一)杀死与取材1、动物致死的方法
(1)麻醉法:乙醚或氯仿;或4戊巴比妥做静脉注射,剂量一般按动物体重每公斤1ml;或用20氨基酸乙酯作腹腔注射,剂量一般按动物每kg5ml。
乙醚麻醉对丘脑下部神经分泌物的染色标本不利。(2)空气栓塞法:不宜用于血管标本的制作。(3)击头法:(4)断头法:(5)放血法:有利于肠系膜铺片的制作。
无论何种致死法,都要求动作迅速,因为动物一旦死亡,其组织与细胞及开始自溶。2、取材注意事项:(1)速度要快,材料新鲜
取材后立即投入固定液中,防止组织会收缩变形,发生自溶现象。脏器的上皮组织最易变质,应争取在半小时内处理完毕。(2)组织块力求小而薄
组织块的大小一般为05×05×02cm、1×1×03cm或15×15×0305cm,最厚不能超过05cm。(3)切取组织应根据需要观察的部位进行选择
所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层,同时考虑好切面方向。病理组织除切取病变部位外,还要切取病变和正常组织交界区域,以利观察分析。(4)勿使组织块受挤压切取组织,刀要锋利,动作要轻,不可来回切割,也不要挤压或牵拉组织。夹取组织时,切勿猛压。(5)保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用生理盐水冲洗。(6)尽量保持组织的原有形态柔嫩、薄的材料,有空气的组织(7)组织块附加标记的方法不同的组织块,要根据切片的要求和需要分瓶放入进行固定,加标签以示区别,并注明固定液、名称、来源、日期等等。(二)固定1、固定的目的(1)迅速阻止组织、细胞的死后变化,防止自溶与腐败,使之尽量保持生前的形态与结构。(2)使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质,以保持其原有状态。(3)使组织内各种物质成分产生不同的折光率,以便染色后易于鉴别和观察。(4)使组织块硬化,使在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏,并便于制作薄片。(5)使组织成分对染料有不同的亲和力,经过染色处理后易于辨认。(6)防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。2、固定的方法(1)蒸汽固定法:比较细小而薄的标本,可用锇酸或甲醇蒸气固定。(2)注射、灌注固定法:某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部或需要对整个动物进行固定。这时宜采用注射固定法,将固定液注入血管,经血管分枝到达整个组织和全身,从而得到充分的固定。
f局部灌注r