RNA提取：用TaKaRaRNAisoReage
t试剂提取RNA步骤200712101352试验前准备的物品1试剂盒之外所需准备试剂：◆氯仿◆异丙醇◆75乙醇（DEPC处理水配制）◆RNasefree水（制备方法：使用RNasefree的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度001（vv），过夜搅拌后，高温高压灭菌。2尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。a）用01DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12小时。b）然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。3用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60分钟）或使用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用01的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。实验操作1RNAisoReage
t的使用量情况如下。
2实验样品的研磨和匀浆。A贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS清洗一次。②每10cm2生长的培养细胞中加入2ml的RNAisoReage
t，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞）。③将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。④室温静置5分钟。B悬浮培养细胞①将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8000g4℃离心2分钟，弃上清。②向每5×106个细胞中加入lml的RNAisoReage
t。③用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。④室温静置5分钟。
fC动物组织、植物材料样品①将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。②对于普通的RNA提取样品，可以向研钵中加入适量的RNAisoReage
t，将研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。对于特殊样品，如肝、脾、骨及软骨等，可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的RNAisoReage
t的匀浆管中，把匀浆管置于冰浴中进行匀浆，直至匀浆液呈无颗粒透明状。③将匀浆液转移至离心管中，室温静置5分钟。④12000g4℃离心5分钟。⑤小心吸取上清液，移入新的离心管中（切勿吸取沉淀）。
3总RNA的提取。①向上述步骤2的匀浆裂解液中加入氯r