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(一)材料与用具
1.材料:鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。2.用具:溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。(二)实验内容与步骤1.取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大小以不超过05立方厘米为宜。切去组织块时动作要轻,切忌用力牵引或挟持,以免组织内部发生变化。组织块取下后,先用085%的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍,如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净,可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次,使其管腔冲洗干净,切忌不可用刀或其他器具刮之。由动物身上切取的组织必须是新鲜的,材料越新鲜越好,一般不应超过死后24小时。如果是管状器官或是其中有分泌之消化液,则死后应迅速采取,以免组织自溶或上皮剥落。材料由动物体取下后应当迅速固定,固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部,将组织固定,以保持其原有的结构。不同的组织应选用适当的固定液。固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1。不应使组织块贴于容器壁上,应记录固定液的名称,材料的种类,动物品种及开始固定的时间。2.冲洗
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f固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。组织块应用纱布包好,注名,放金属水洗网中用流水冲洗,甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时,Boui
s固定液固定的组织水洗24小时。AFA固定液则不需要水洗。
3.脱水和硬化
经过固定后的组织在水洗后要进行脱水,脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来,使组织逐渐变硬,便于油类或其他透明及浸入,为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精,因为酒精与水有很大的亲和力,酒精浓度可以逐渐升高,置换出组织中的水。脱水必须充分,脱水不充分会影响透明和浸蜡。脱水过程要逐级上升,不能操之过急,跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下:
30%→50%→70%→80%→90%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ组织块在各级较低浓酒精(小于70%)中脱水的时间应视组织块的大小而定,大小不超过
05立方厘米的组织块脱水时间为6~12小时,在高浓度酒精中(大于70%)脱水时间为3小时左右。组织块在无水酒精中需经过两次处理,以保证脱净水分。由于无水酒精有使组织变脆的缺点,故在无水酒精中脱水的时间不宜过长,一般应在15~30分钟左右。
在脱水瓶中酒精的量与组织块之比约为50:1。
简化步骤如下:
70(一夜)80(1小时)90(30分)95(30分)100(15分)r
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