能异常隐源性肝酶升高最为常见的原因,也几乎是至少60的病因迄今不明的肝硬化病例的基础病因。非酒精性脂肪性肝炎
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alcoholicsteatohepatitis,NASH是NAFLD的一种病理类型,是进展性疾病,可以发展为肝硬化、肝功能衰竭和肝癌等终末期肝病,其病理生理机制尚不完全清楚。疾病的发病机制只有通过与疾病相似的合适动物模型才可以得到阐明,本课题采用了高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎的动物模型,观察非酒精性脂肪性肝炎的动物模型的病理变化特点和探讨最佳的饲料配比方案。
1材料与方法
11实验动物KM小鼠,清洁级,小鼠体重为(253±18)g。
12实验试剂胆固醇上海源聚生物科技有限公司生产,批号:080502;胆酸(中国医药集团上海化学试剂公司,批号:20070120);猪油、蛋黄粉、普通饲料(市购);生理盐水。
13实验仪器美国贝克曼CX5PRO全自动生化分析仪,尼康YS100和尼康E200显微镜、加拿大显微摄像系统PLB681CU,上海良平仪器仪表公司JA3003电子天平,沈阳龙首电子仪器公司LS2055AT全自动石蜡切片机
14动物分组及处理50日龄以上雌鼠200只,随机取其中80只,并把KM80只小鼠随机分为甲、乙、丙、丁四组各20只。甲、乙、丙为实验模型组,丁组为正常对照组,甲、乙、丙三组给予不同梯度高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎模型。见表1。高脂饮食由普通饲料加猪油,蛋黄粉,胆固醇,胆酸组成。在造模后每1周分别取模型组动物各5只处死,观察其病理模型形成情况,做血液指标检测及病里切片。分别在第2周。第4周末将小鼠用2戊巴比妥钠(45mgkg)腹腔注射,麻醉后下腔静脉取血,将血标本离心后用于血脂检测;取肝左叶,用10中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋切片,作肝组织病理学观察。
15观察指标及检测
151一般项目观察动物的体重、饮食、毛发、活动情况、肝体重比等。
152血脂检测动物处死前,采取各组动物血液分离血清,采用全自动生化分析仪检测。
153病理学观察取新鲜肝组织左叶,用10中性福尔马林固定,石蜡包埋5μm切片,HE染色作肝组织病理学观察,了解肝组织脂肪变性、炎症活动程度。
16统计学方法应用SPSS110统计软件对数据进行统计学处理,计量资料用均数±标准差表示,采用t检验,计数资料比较采用卡方检验。以P
2结果
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21动物的一般情况实验期间正常组动物精力充沛,灵活好动,饮食正常,皮毛整洁,体重缓慢增加;模型组饮食量大,嗜睡,毛色偏黄,个体较大,体重增长较正常组快,模型组动物乙组造模r