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组织研磨步骤
准备工作:统计好组织数量和类型,与医生发来的样本信息进行逐一匹配,并进行重新编号(如之前有同一来源同一癌肿组织则继续该编号),统计好样本情况。如有问题及时与老师和医生沟通。整理完毕后打印成纸质版。
一、研磨工具的清洗:首先将研钵、杵子、镊子、剪刀用自来水清洗,并用洗洁精刷洗或浸泡,并用自来水漂洗干净;第二,用去离子水漂洗所有物品一遍;第三,在红桶里头加入4L的去离子水,然后加入4ml的DEPC溶液,用玻璃棒搅拌混匀后,将所用的研钵、杵子、镊子、剪刀、纱布放入水里,盖上桶盖,过夜(8h)。二、研磨工具的灭菌:将水里的东西取出后,倒扣在干净PE手套上晾干片刻,放入饭盒里(每盒放4套研磨组织的用具),然后用报纸包上后,放入灭菌锅灭菌121℃,30mi
。三、组织块的研磨:擦净工作台,取适量液氮于保温杯中,然后倒入研钵中(一半的量)预冷研钵和杵子。剪取米粒大小的组织块放入研钵中,倒入液氮(少量多次),开始研磨(始终在液氮环境中操作,切勿无液氮防止降解),直至变成均匀粉末状,待研钵回复室温后,加入1mlTrizol分到两个无RNase的EP管中。注:1在组织研磨过程中,取一个样磨一个样,切勿把组织在室温长时间放置。2要注意编号与顺序,纸质版资料、研钵摆放顺序、最后收集的EP管,全部保持一致,不要随意摆放或调整。3研磨过程中注意观察是否有小组织块溅出,若有溅出则调整研磨力度并且及时将其放回研钵中。四、取其中一管提RNA,做反转录,另一管留存备用。五、将试验台打扫干净,清洗各种研磨工具见(步骤一)。
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