小鼠脾脏单个核细胞分离及细胞计数
实验时间：
实验地点：
实验人：
1实验原理
小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各
类免疫细胞。免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。
红细胞由于细胞结构较为简单，仅有细胞膜结构，对于膨胀的耐受能力较差，因
此绝大部分就会涨破，受到破坏。是一种比较温和的去除红细胞最简便易行的方法。
2实验材料：
1健康小鼠
2手术器械（剪刀、镊子）、解剖板370乙醇4PBS缓冲液、红细胞裂解液（ACK）
5台盼蓝6细胞计数板、计数器7离心机
8显微镜
3实验方法：
取小鼠脾脏将小鼠颈椎脱位处死，用酒精消毒。用剪刀剪开背部皮肤，再找到脾脏，用镊子夹出脾脏并剪除周围组织。
制备单个核细胞悬液将取出的脾脏置于盛有3mlPBS缓冲液的平皿中，然后再置于尼龙指套中，用
f针芯轻轻碾压使得单个核细胞悬浮于平皿中。吸取平皿中细胞悬液置于刻度离心管（15ml）中，以1500rpm离心10mi
，弃去上清液，加入ASK至23ml，轻轻吹打混匀并放置2mi
，以破坏红细胞。然后加入PBS缓冲液至10ml，以1500rpm离心10mi
。弃去上清液，用PBS缓冲液定容至2ml，吹打混匀即为小鼠脾脏单个核细胞悬液。计算细胞浓度稀释十倍，随机选取一个大方格计数细胞计数为324个，计算细胞浓度为324×104×10×107ml计算细胞活力在总计为324个细胞中计数，死亡细胞有16个，计算细胞活力为：32416324×100在理论范围之内
4实验结果
研磨脾脏得到细胞悬液本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少量PBS液中缓慢研磨，获得
细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不能滤去所有结缔组织，操作中会有结为絮状团块的结缔组织。这些结缔组织在离心后会和细胞绞缠在一起，去除十分麻烦，而且会损失细胞。应该在离心之前尽早用吸管吹打后小心弃去（这样损失的细胞比较少，造成较小的误差）。
研磨脾脏时的力度、时间、温度都会影响细胞的活性。所以应置于冰上快速、轻柔地研磨，置于液体中避免干磨。我们在实验室室温下碾磨，造成细胞破碎较多，影响最终实验结果。白细胞计数
在使用血球计数板时，遇到了镜下看不到计数板格子线的问题起初，我们小组能够在镜下观察到细胞，但是细胞清晰时无法找到计数板格子线。后来我们
f意识到，这可能是因为充池后立即观察，细胞还悬浮在液体中，和方格线不在同一个平面上。静置2r