组技术的基本工具
1、基因工程的概念:什么是基因工程?你觉得,基因工程的诞生和发展能否离开理论研究和技术创新?
2、限制性核酸内切酶“分子手术刀”(1)从噬菌体侵染细菌的实验来看,细菌等单细胞原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵,那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭,有什么保护机制?由此可知,限制酶可以从哪些生物中分离出来?
(2)限制酶是如何切割DNA分子的?
(3)参考课本P4图12,指出限制酶能破坏哪个磷酸二酯键
(4)以EcoRI为例,画出限制酶切割后形成的末端。
3、DNA连接酶“分子缝合针”(1)DNA连接酶是怎么分类的?
(2)DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事儿吗?有哪些区别?
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靠山山会倒,靠水水会流;靠庙庙会塌,靠神神会跑;靠自己永远靠得牢!
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f(3)EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶作用效果一样大吗?为什么?
ABamHI和EcoRI;末端互补序列AATTCEcoRI和Hi
dⅢ;末端互补序列AATT【我的收获】
BBamHI和Hi
dⅢ;末端互补序列GATCDBamHI和BglII;末端互补序列GATC
4、基因进入受体细胞的载体“分子运输车”:(1)载体的作用是什么?为什么需要载体?把单独的DNA片段导入受体细胞不行吗?
(2)我们选用从霍乱弧菌中分离出来的质粒做载体,可以吗?为什么?
【知识链接与拓展】1、运载体的选择:基因工程中的载体需要具备以下条件:能够自我复制,这样才目的基因才不会随着受体细胞的增殖而丢失;有标记基因,这样便于重组DNA的鉴定和选择。要有一个到多个限制酶切割位点,这样才有供
(3)我们能不能用肉眼直接观察到载体进入受体细胞?那如何鉴定呢?
目的基因插入的地方。要对受体细胞无害,同时分子不能太大,否则不便于操作。除了质粒外,还有动、植物病毒等也能作为基因工程的载体。但是一般上用作基因工程的质粒,都是经过人工修饰的。2、几种酶的区别:(1)DNA水解酶:能够将DNA水解成四种脱氧核苷酸,彻底水解成膦酸、脱氧核糖和含氮碱基。
(4)如果载体上没有限制酶切割位点,能否把目的基因运输进入受体细胞?
(2)DNA解旋酶:能够将DNA或DNA的某一段解成两条长链,作用的部位是碱基和碱基之间的氢键(3)DNA聚合酶:能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链。(4)DNA连接酶:是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口,连接的是DNA片段。
※5、下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤,这一步需用到的工具是(
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A.DNA连接酶和解旋酶C.限制性核r