倾注接种法也常用于微生物平板菌落计数,如水或牛奶的活菌数测定。
在平板涂布法和倾注接种法中,平板涂布法比较适合于好氧细菌和有气生菌
f丝的放线菌的分离,而倾注接种法较适合兼性厌氧的细菌和酵母菌的分离。
3平板计数原理:稀释平板计数法是一种最常用的活菌计数法。其依据是微生物在高度稀释的
条件下,在固体培养基上形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖形成的,因此一个菌落形成单位代表一个细胞。在计数的时候,首先将待测样品进行系列稀释,使待测样品中的微生物细胞成单个细胞存在,再取一定量的稀释液接种到固体培养基中(平板接种培养有两种方法:平板涂布法和倾注接种法,我们使用的是平板涂布法),使其均匀地分布于培养基的表面或内部(倾注接种法),经适宜培养后,单个细胞生长繁殖形成菌落,计数菌落数目,即可换算出样品中的含菌数目。
平板菌落技术法常用语生物制品的检验、土壤含菌量的测定以及食品、水源的污染程度的检验等。
三.实验材料
1菌种:大肠杆菌菌液。2培养基:LB固体培养基。3仪器:无菌涂布器、无菌吸管6支、接种环、无菌培养皿、5支盛有45mL无菌水的试管、试管架、恒温培养箱、酒精灯、马克笔。
四.实验步骤
1涂布平板法(1)培养皿、吸管和试管编号:取6只无菌的培养皿,分别标号103、104、105三种稀释度,各两皿(标准操作为每组三个皿,此处只为练手用两个皿)。将5只试管分别标注12345表示稀释倍数。将6只吸管分别标记123456,以方便吸取菌液。(2)制备无菌平板:点燃酒精灯,将融化并冷却至50℃左右的培养基(手触摸不烫手)倒入无菌培养皿中,倒的时候右手握住三角瓶的瓶身或者是瓶底,不要握住瓶口,因为倒平板时要先将瓶口加热,用手握住瓶口容易烫伤并且也握不稳。操作过程中要用左手食指和大拇指拿稳皿盖,剩下三个指头拖住皿身,使其尽量水平在酒精灯附近操作。倒平板的时候大约每个倒1520ml太少了涂平板时容易涂破,太多了造成浪费。倒完后将培养皿盖上平行沿着桌面慢慢推向桌子里面。平置待凝。(3)稀释菌液:。取5支盛有45mL无菌水的试管,稀释倍数依次为101、102、103、104、105。用1ml无菌吸管(看清吸管的量程)吸取05mL已充分混匀的大肠杆菌菌液(待测样品),放至装有45ml无菌水带有标记1的试管中,此即为10倍稀释。将101稀释的试管振荡使菌液充分混匀。另取一支1mL无菌吸管插入1号试管中吸取101已充分混匀的菌液05ml,放至装有45ml无菌水带有标r