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、试管、电子天平、移液管、洗耳球、722型分光光度计、离心机、微量加样器、恒温水浴锅。
12实验方法:121种子发芽率的测定:各取50粒吸胀的玉米种子或小麦种子,沿胚的中心线切成两半(严格区分两个半粒),进行下列实验:其中50个半粒进行TTC染色(30℃水浴20mi
);另50个半粒进行曙红染色(室温染色10mi
),洗净后观察。根据两种方法的染色情况,分别计算发芽率。122脯氨酸(Pro)含量的测定:提取:分别取01g实验组和对照组的幼苗→加入3mL3磺基水杨酸(SSA)和少许石英砂→充分研磨→用2mL3SSA洗研钵→5000rpm离心10mi
→量上清液体积。测定:上清液各2mL→分别加入2mL冰乙酸和2mL茚三酮试剂→煮沸15mi
→冷却后→5000rpm离心10mi
(若没沉淀可略此步骤)→分别测定A520。计算:
fProco
te
t
A520V总V显LWV用
umolgFW
1
123丙二醛(MDA)含量的测定:提取:分别取01g实验组和对照组→加入3mL01TCA和少许石英砂→充分研磨→用2mL01TCA洗研钵→5000rpm离心10mi
→量上清液体积。测定:分别取上清液各1mL→加入05TBA(用20TCA配制)3mL→煮沸15mi
→冷却后→5000rpm离心5mi
(视沉淀有无)→分别测定OD450和OD532。计算:OD450C1×854OD532C1×74155000×C2求解方程得:C1(mmolL)1171OD450C2(molL)645OD532056OD450式中,C1为可溶性糖的浓度,C2为MDA的浓度。
124过氧化氢(H2O2)含量测定:提取:分别取01g实验组和对照组→加入3mL03三氯乙酸(TCA)和少许石英砂→充分研磨→用2mLTCA洗研钵→5000rpm离心10mi
→量上清液体积。测定:分别取上清液各4mL→加入01TiSO42用20vvH2SO4配制02mL→摇匀→OD410。计算:
H2O2co
te
t
A410V总1umolgFWV显LWV用
125抗氧化酶活性的测定:提取:分别取01g实验材料→加入少许石英砂和3ml提取液(50mmolLPBS
fpH60内含01mmolLEDTA1PVP)→充分研磨
→转入离心管
中→用2ml提取液洗研钵→5000rpm离心10mi
→量上清液体积→用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至20或80℃保存。POD测定:取POD反应混合液(10mmolL愈创木酚,5mmolLH2O2
用PBS溶解)295ml,加入酶液50ml(空白调零用提取液取代),立即记时,摇匀,读出反应2mi
时的A470。PPO测定:取PPO反应混合液(20mmolL邻苯二酚,用PBS溶解)29ml,加入酶液01ml(空白调零用提取液取代),立即记时,摇匀,读出反应2mi
时的A410。计算:以每分钟A值变化001所需要的r
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