实验一氨基酸纸层析法
一、实验目的
通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。
二、实验原理
纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上此点称为原点，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：原点到层析斑点中心的距离Rf原点到溶剂前沿的距离
在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件如温度、展层溶剂的组成不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目的，这种方法称为双向纸层析法。氨基酸无色，可利用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。所有氨基酸及具有游离α氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。
三、药品器材
1器材层析滤纸（新华1号）、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、刻度尺、铅笔。2试剂
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f1氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液（各组分浓度05）。2展层剂：V正丁醇（AR）V80％甲酸V水15323显色剂05g茚三酮溶于100mL无水丙酮，贮存于棕色瓶中备用。
四、实验方法
1滤纸准备：选用新华1号滤纸，裁成5cm×20cm的长方形，在距纸一端2cm处用铅笔轻轻划一基线，在线上每隔1cm作一记号，标出4个原点。2点样：用毛细管将氨基酸样品分别点于原点用量1020uL，用吹风机稍加吹干后再点下一次，重复2～3次，点子直径不能超过3mm。3展层：将点好样的滤纸放入装有展层剂的展层缸内盖展层缸进行展层，展层剂液面不能淹没原点基线，当溶剂上升至1520cm时，取出滤纸，用铅笔描r