实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用
摘要实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃而且与常规PCR相比它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点目前已在动植物基因工程微生物和医学领域中得到广泛应用。本文对实时荧光定量PCR技术的原理，检测方法的原理、优缺点进行了评述重点及创新点是对实时荧光定量PCR技术在医学领域，食品行业，植物方面的应用进行了比较全面的综述并对实时荧光定量PCR技术的普及应用及领域的前景做了进一步的展望。关键词：实时荧光定量PCR；应用；展望
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聚合酶链反应PCR技术自1985年问世以来，以其灵敏性高、特异性强和速
f度快在分子生物学等科研领域得到了广泛应用。但是，由于传统的PCR技术不能准确定量，在操作过程中易受污染而使假阳性率偏高；因此，使其应用受到限制。实时荧光定量PCR技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点，已成为了分子生物学研究的重要工具。文章对实时荧光定量PCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进行了综述。
1实时荧光定量PCR技术概述
11实时荧光定量PCR技术的原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧
光积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法1。实时荧光定量PCR是在反应体系中加入荧光基团，使产物的数量与检测到的荧光强度成线性关系，从而得出产物的扩增曲线如图1。在PCR反应早期不能将产生荧光的水平与背景明显区别之后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期因此可以在指数期的某一点r