时传一次代（视生长情况）。ES细胞的换液1提前半小时左右将培养基从4℃冰箱取出，放于室温（或者放于37℃温箱内）；2细胞培养皿从培养箱内取出，相差显微镜下作常规观察（判断生长情况，并确证未发生污染）后转入无菌操作台内；3将ES细胞培养皿内的液体吸出、弃去，换新鲜培养基（6cm培养皿约5mL，35cm培养皿约3mL培养基；若死细胞较多则可以先用PBS洗一次，再加培养基）；4放回培养箱继续培养。ES细胞的传代1前一天下午做好所需数量的Feeder细胞板；2提前半小时左右将培养基从4℃冰箱取出，放于室温（或者放于37℃温箱内）；3将ES细胞培养皿、Feeder细胞培养皿从培养箱内取出（相差显微镜下作常规观察，Feeder细胞应生长良好，细胞覆盖95左右，至少90以上的培养皿面积）；ES细胞应生长良好，接近长满培养皿，细胞集落大小一致、疏密均匀，集落形状规则、呈椭圆形、边缘光滑、表面光滑，细胞生长致密、核大、胞质少；4将ES细胞培养皿内的液体吸出、弃去，用PBS1mL左右洗一遍，加入胰蛋白酶溶液，作用约30秒，小心吸出胰蛋白酶溶液，弃去；再作用15分钟，不时观察，待细胞层（皿底一层白色脏东西样膜）出现裂缝并明显开始下滑时，补加培养基，适度吹打（视消化程度及管口粗细而定，至看不到明显的大的细胞团块为止）；平均分到Feeder培养皿中（滴加，以
f免将Feeder细胞吹脱落下来），滴加补加培养基至5ml左右（滴加，以免将Feeder细胞吹脱落下来；若为35cm培养皿，则补加至3ml左右），作好标签；5前后左右水平晃动培养皿，使ES细胞均匀分布于培养皿中，放入培养箱继续培养。ES细胞的冻存1常规方法将细胞消化成单细胞悬液；2转入试管，1000转分钟离心5分钟；3配适量冻存液（为含10二甲亚砜（DMSO），10FBS的DMEM培养液）；4弃上清，每管加入1ml冻存液，吹打成细胞悬液（只要使ES细胞分散成35个细胞的小团块即可），转入冻存管，作好标签；5放入程序冻存盒内24小时后转入液氮罐中冻存。
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