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八)植物染色体Giemsa分带技术一、实验目的通过实验,分带技术和方法。(1)通过实验,掌握植物染色体Giemsa分带技术和方法。
(2)学习染色体带型分析方法。二、实验原理植物染色体Giemsa分带技术是本世纪70年代以来兴起的一项细胞技术,它已广泛用于植物细咆学、细胞遗传学、植物分类学、物种起源、染色体工程、植物育种等方面研究。显带原理是借助于特殊的处理程序后,进行Giemsa染色。使染色体某些结构成分发生特异反应而出现深浅不同的带纹;从而使核型分析中更准确地识别染色体的每个成员以及其结构变异。通过改变Giemsa分带处理程序可产生不同带型,因此有C带、G带、N带、Q带、T带等不同技术。C带组成异染色质带:C带技术是应用最广泛的技术,它主要显示着丝粒、端粒,核仁组成区域或染色体臂上某些部位的组成异染色质而产生相应的着丝粒带、端粒带,核仁组成区带,中间带等,这些带可以在一条染色体上同时出现,也可以只有其中的一条或几条带。G带Giemsa带:显示染色粒,G带分布干染色体的全部长度上,以深浅相间的横纹形式出现。也有入认为G带显示的是染色体本身固有的结构,G带能清楚地反映染色体的纵向分化,能提供较多的鉴别标志,因此,G带是分带技术中最有价值的一种,目前G带技术在我国处于领先地位。R带反带:与G带相反的染色带。由于处理程序不同,染色体在同一部位,G带染色深处R带染色浅处,反之,G带染色浅处R带染色深处。N带:专一地显示出核仁组织区。T带:专一地显示出端粒区域。以上几种带型在植物上应用最多的为C带和G带.本次实验介绍G带分带技术三、实验材料1大麦Hordeumspp2
=14的种子;2普通小麦Triticumspp2
=42的种子;3蚕豆Viciafaba2
=12的种干;4洋葱Alliumcepa2
=16、大蒜Alli
mcepafistulosum2
=16的鳞茎。以上材料可任选一种。四、实验器具和药品1.器具培养箱、恒温水浴锅,分析天平、小台称200g、量筒50ml、100ml、1000ml、l0ml、烧杯200ml、容量瓶1000m1、棕色试剂瓶200ml、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片.显微镜、显微照相及冲洗放大设备、剪刀、镊子、刀片、滤纸、玻璃板、牙签、切片盒.2.药品Giemsa母液、磷酸缓冲液、氯化钠、柠檬酸钠、甲醇、乙醇、冰醋酸、氢氧化钡、秋水仙素或对二氯苯、α溴萘、纤维素酶、胰蛋白酶、醋酸洋红、45%醋酸等。五、实验步骤G带显示的是染色体自身固有结构,能否显示出来.与染r
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