实验报告
课程名称实验类型仪器分析实验□验证□设计□综合实验评分实验项目荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验时间2010年3月24日
实验指导老师
一、实验目的实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。二、实验原理维生素B2又叫核黄素，VB2是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为：
OH
HOHOHOHH3CN
HHHHNO
NHH3CNCO
由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素B2溶液在430440
m蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535
m附近。维生素B2在pH＝67的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2303ФI0εbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：FKc这是荧光光语法定量分析的依据。三、仪器与试剂
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f1、主要仪器：HitachiF2500荧光分光光度计；石英皿：1cm；容量瓶：50mL；移液管：5mL。2、试剂：维生素B2标准溶液：100μgmL；待测样品溶液。四、实验步骤1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液100μgmL100mL、200mL、300mL、400mL、500mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。待测。2、待测样品溶液（2号样品）的配制取待测样品溶液200mL于50mL容量瓶中，加入去离子水稀释至刻度，摇匀。待测。3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制将装有3号标准溶液（300mL定容至50mL）的石英皿放入荧光分光光度计中，设置λem＝540
m为发射波长，在250400
m范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在400600
m范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长λem。4、标准溶液及样品（2号样品）的荧光测定将激发波长固定在最大激发波长，荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处。r