实验九甲醛滴定法测定氨基酸一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：H3NRCOOH2NRCOOHNH是弱酸，，完全解离时pH为11～12或更高，若用碱滴定NH所释放的H来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使NH释放H，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内pH90左右。因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。RCHCOONHRCHCOONH2H中和RCHCOONH2RCHCOO
3333
NaOHHCHO
fNHCH2OHRCHCOONCH2OH2如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量（脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定mL数偏低。酪氨酸的滴定mL数偏高）。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。三、器材药25mL锥形瓶；3mL微量滴定管；吸管；01mol／L标准甘氨酸溶液300mL准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL；01m01／L标准氢氧化钠溶液500mL；（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。）酚酞指示剂20mL05％酚酞的50％乙醇溶液中性甲醛溶液400mL在50mL36～
HCHO


f37％分析纯甲醛溶液中加入1mL01％酚酞乙醇水溶液，用01mol／L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重新中和。四、操作1．取3个25mL的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2mL01mo1／L的标准甘氨酸溶液和5mL水，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛溶液，再混匀，分别用01mo1／L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率％实际测得量×100加入理论量公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以
f14008。2mL乘以标准甘氨酸的摩r