它们有各自的发光底物。1221HRP标记的CLEIA
f常用的底物为鲁米诺3氨基邻苯二甲酰肼lumi
ol或其衍生物如异鲁米诺4氨基邻苯二甲酰肼是一类重要的发光试剂。其结构如图4所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行在过氧化物酶及活性氧过氧化阴离子O2单线态氧1O2羟自由基OH过氧化氢H2O2存在下生成激发态中间体当其回到基态时发光其波长为425
m。早期用鲁米诺直接标记抗原或抗体但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物在过氧化物酶和起动发光试剂NaOHH2O2作用下鲁米诺发光发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。KodakAmerliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。1222增强发光酶免疫分析e
ha
cedlumi
esce
cee
zyme
immu
oassayELEIA在发光系统中加入增强发光剂如对2碘苯酚等以增强发光信号并在较长时间内保持稳定便于重复测量从而提高分析灵敏度和准确性。在全自动分析仪上还可通过计算机严密控制进行自动操作如加试剂混合温育洗涤加发光试剂发光计数数据处理绘制标准曲线直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。AmerliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂其发光时间可持续长达20mi
试剂盒有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素与性
f激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。1223ALP标记的CLEIA
所用发光底物为环12二氧乙烷衍生物用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的金刚烷基其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。最常使用的底物AMPPD32spiroadamata
e4methoxy43phosphoryloxyphe
yl12dioxeta
eDioxeta
e中文名为32螺旋金刚烷4甲氧基43磷氧酰苯基12二氧环乙烷。在碱性磷酸酶ALP作用下磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基得到一个中等稳定的中间体AMPD半寿期为230mi
此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子当其回到基态时产生470
m的光可持续几十分钟如图5。AMPPD为磷酸酯酶的直接化学发光底物可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物。可检测到碱性磷酸r