植物基因克隆的策略与方法基因的克隆就是利用体外重组技术基因的克隆就是利用体外重组技术将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、基因的完整的全序列确定染色体定位阐明基因的生化功能基因的完整的全序列确定染色体定位阐明基因的生化功能明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育生理对特定性状的遗传控制关系生化分子遗传等学科的迅速发展使人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识再运用先进的酶学和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆育性、高蛋白质及与植物发育有关的许多基因。我们实验室对天麻抗真菌蛋白基因作了功能克隆的研究舒群芳等1995舒群芳等1997为了克隆植物基因也探讨了其它克隆方法本文论述基因克隆的策略、方法及取得的一些进展。1功能克隆fu
ctio
alClo
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g功能克隆就是根据性状的基本生化特性这一功能信息在鉴定和已知基因的功能后克隆Collis1995。其具体作法是在纯化相应的编码蛋白后构建cDNA文库或基因组文库DNA文库中基因的筛选根据情况主要可用二种办法进行1将纯化的蛋白质进行氨基酸测序据此合成寡核苷酸探针从cDNA库或基因组文库中筛选编码基因2将相应的编码蛋白制成相应抗体探针从cDNA入载体表达库中筛选相应克隆。功能克隆是一种经典的基因克隆策略很多基因的分离利用这种策略。Hai
等从葡萄中克隆了两个编码白藜芦醇合成的二苯乙烯合成
f酶基因Vst1和Vst2葡萄中抗菌化合物白藜芦醇的存在可以提高对灰质葡萄孢Botrytisci
erce的抗性在烟草和其它一些植物中无二苯乙烯合成酶因此克隆该基因经过转基因后对有些植物产生对灰质葡萄孢的抗性很有意义Hai
等1985。Ko
do等1989年对编码水稻巯基蛋白酶抑制剂的基因组DNA做了克隆和序列分析Ko
do等1989。周兆斓等构建了水稻cDNA文库分离了编码水稻巯基蛋白酶抑制剂的cDNA周兆斓等1996。植物蛋白酶抑制剂是一类天然的抗虫物质它可抑制摄食害虫对蛋白质的消化使害虫因缺乏所需氨基酸而导致非正常发育或死亡。胡天华等人从烟草中分离出流行于我国的黄瓜花叶病毒CucumberMosaicvirusCMV并克隆了编码该病毒外壳蛋白的cDNA基因胡天华等1989。王春香等从感病的烟草叶片中分离纯化了马铃薯x病毒potatovirusXpvx克隆了完整的马铃薯x病毒外壳蛋白基因并将外壳蛋白基因转入马铃薯中以r