稀释法（MPN5管法）C1稀释称取样品100g，加入带玻璃珠的100mL的无菌水中液体菌剂取l00mL加入90mL的无菌水中，静置20mi
，在旋转式摇床上200rmi
充分振荡30mi
，即得到1×101稀释度的菌悬液。用无菌移液管吸取50mL上述菌悬液加入到装有45mL无菌水的三角瓶中，充分振荡摇匀，得到1×102稀释度的菌悬液，依此方法制成1×103、1×104、1×105……稀释度的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。C2加样选择适宜的5个连续稀释度，用无菌移液管分别吸取不同稀释度的菌悬液10mL，加到已准备好的盛有90mL无菌培养基的螺口试管中，每一稀释度重复接5支试管（不同稀释度间更换无菌移液管），同时用无菌培养液作对照。C3培养接种后立即拧紧塑料帽并摇匀，将接种好的试管放到适宜的条件下培养。
fC4计算根据各稀释系列试管中有无待测微生物生长或其生理反应的正或负得出数量指标，并在相应的MPN统计表中查出近似值（见表C1），即可计算出待测样品的有效活菌数，以亿个mL或亿个g表示。计算方法：1mL（g）样品中的有效活菌数菌数近似值×数量指标第一位数的稀释倍数C5计数规则在稀释系列中必须最后一个稀释度所有重复间都没有微生物生长。确定数量指标系取稀释系列中所有重复都有生长或是正反应的最高稀释度为数量指标的第一位数字，总共取三个连续稀释管的结果查表。C51在全部5支试管中均出现生长的稀释度中，把出现生长的稀释度倍数最高的那一级放入数列。例如：为55300时，则取530数列；C52在全部5支试管中均不出现生长的稀释度中，把稀释度倍数最低的那一级放入数列。例如：为53000时，则取530数列；C53如果应用上述两条规则，会出现采用如55430这样的4个等级的稀释度的情况。此时，可先取前面的543数列，后取430数列，分别求出lgMPN，然后算出其真数的平均值。在此列中，数列543的lgMPN为1447，数列430的lgMPN为04311（后一数列与前一数列相应稀释了10倍，故要加1进行校正），（14471431）21439，所以MPN275。
表C1MPN，lgMPN表
MPN
阳性试管数
MPN
阳性试管数
（相当于
（相当于
第一第二第三第一稀释LgMPN第一第二第三第一稀释LgMPN
稀释管稀释管稀释管管1毫升）
稀释管稀释管稀释管管1毫升）
0
0
0
0

5
00
230362
0
1
0
018025515
0
1
310491
1
0
0
020030115
1
0
330519
1
1
0
040060215
1
1
460663
2
0
0
045065315
2
0
490690
2
0
1
068083315
2
1
700845
2
1
0
068083315
2
2
950978
r