二基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取目的基因的获取1目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2原核基因采取直接分离直接分离获得，真核基因是人工合成人工合成目的基因的常人工合成。直接分离人工合成用方法有反转录法化学合成法反转录法_和化学合成法化学合成法_。反转录法3PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制DNA（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引热稳定物起始互补链的合成。物起始互补链的合成第二步：基因表达载体的构建基因表达载体的构建1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在稳定存在，并且可以遗传至下一代遗传至下一代，使目的稳定存在遗传至下一代基因能够表达和发挥作用表达和发挥作用。表达和发挥作用2组成：目的基因启动子终止子标记基因目的基因＋启动子终止子＋标记基因目的基因启动子＋终止子（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段片段，位于基因的首端首端，是RNA聚合首端蛋白质。酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质蛋白质尾端。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端尾端（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因是否含有目的基因，从而将含是否含有目的基因含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因抗生素基因。有目的基因的细胞抗生素基因第三步：将目的基因导入受体细胞_将目的基因导入受体细胞_将目的基因导入受体细胞1转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和是目的基因进入受体细胞内，是目的基因进入受体细胞内表达的过程。表达的过程。2常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法其次还有基因农杆菌转化法，枪法和花粉管通道法花粉管通道法等。枪法将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵受精卵。
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f将目的基因导入微生物细胞：3重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞含有基因表达载体受体细胞的依据是标记含有基因表达载体受体细胞标记基因是否表达。基因是否表达第四步：目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达1首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因上是否插入了目r