有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心
20分钟左右（20003000转
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7274）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心
20分
钟左右（20003000转分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH74。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持28C的温度。加入一定量的PBS（PH74）用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心20分钟左右（20003000转分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于20C保存，但应避免反复冻融
7不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤
1标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔
10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100M，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50d，混匀；然后从第一孔、第二
孔中各取100d分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50d
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50d弃掉，再各取50d分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50d分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液
50d，混
匀后从第七、第八孔中分别取50d加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50d，混匀后从第九第十孔中各取50d弃掉。（稀释后各孔加样量都为50d
浓度分别为1800
gL1200
gL600
gL300
gL150
gL）。
2加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40d然后再加待测样品10d（样
品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。
4配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置
30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6加酶：每孔加入酶标试剂50d，空白孔除外。
7温育：操作同3。8洗涤：操作同5。
9显色：每r