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与肿瘤细胞迁移实验类似。tra
swell侵袭实验,其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开,细胞放在低营养的培养液里,为了找吃的,细胞会往高营养的培养液里面跑,但是有膜挡着,所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上一层基质胶,模仿细胞外基质,于是细胞要把基质消化了才可以从低营养的培养液跑到高营养的培养液里面,最后我们检测高营养的培养液里细胞量就可以知道细胞的侵袭能力了,大概原理就是这样的。第一节概念这里想明确两个概念,一个是Tra
swell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1Tra
swell关于Tra
swell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可以这么理解吧,tra
s这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透性的杯状的装置,根据Cor
i
g公司的Tra
swell说明书中的介绍,可以认为这是一种膜滤器(Membra
efilters),也可认为是一种有通透性的支架(permeablesupports)。更准确地说,Tra
swell应该是一种实验技术,这项技术的主要材料是Tra
swell小室(Tra
swellchamber,Tra
swelli
sert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对Tra
swell会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。
但无论是何种外形,其关键部分都是一致的,那就是杯子底层的一张有通透性的膜,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔,孔径大小有01-120m,根据不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbo
atemembra
e)。
下图是一个Tra
swell装置的纵切面
f将Tra
swell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。下面参考guxuefe
g战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择,当然不同细胞其体积不同,具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验:(1)共培养体系:小于30um孔径条件下,细胞不会迁徙通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择30m以下孔径。常用04、30m。我们实验室用的是04m。
将细胞A种于r
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