双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价
摘要：目的评价双缩脲法测定血清总蛋白的方法性能。方法配制双缩脲试剂，并用所配双缩脲试剂和标准血清蛋白进行批内重复性试验、回收试验、线性范围测定。结果双缩脲法测定血清总蛋白的批内重复性试验的变异系数CV为642，回收试验平均回收率为1093，线性范围测定的R为09877。结论双缩脲法测定血清总蛋白的性能不高，本人测得的批内重复性试验的变异系数CV偏大，回收率偏高，线性范围一般，或许这是个人操作因数，因为还有其他同学的结果比较好的。
关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价
双缩脲法测定血清总蛋白至今已经有近100年的历史，其间该方法也得到不断改进，是目前测定血清总蛋白的常用方法之一。《全国临床检验操作规程》推荐Doumas双缩脲配方作为血清总蛋白测定的常规方法1。方法学评价对于医学检验专业学生日后在工作中评价检验方法非常重要，对培养学生逻辑思维和实验室质量控制具有重要作用。本文介绍双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价，对学生练习和掌握方法学评价有重要意义。
双缩脲试剂鉴定蛋白质的原理：双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此，也能在碱性环境中与二价铜离子结合生成紫红色络合物。此反应不需要加热，被用来定性鉴定蛋白质。但请注意：凡含有2个以上肽键的物质或含有1个肽键和1个一CSNH2、一CH2一NH2、一CH20H、一CHOHCH2NH2等基团的物质，以及乙二酰乙二胺都有此颜色反应。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽均有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽2。
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f紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差，不适合微量蛋白的测定。
1仪器与试剂11仪器721型分光光度计；水浴箱。12试剂牛血清白蛋白；硫酸铜结晶CuSO45H2O；酒石酸钾钠NaKC4H4O64H2O；氢氧化钠NaOH；碘化钾KI；蒸馏水。
2双缩脲的配制21称取6gNaOH溶于新鲜制备的25ml蒸馏水中，配成6molL氢r