根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展
摘要：根癌农杆菌介导的遗传转化系统因具有操作简便，转化效率高，容易得到单拷贝随机插入的转化子，并且转化子稳定等特点而成为近年来丝状真菌遗传转化的主要研究手段之一，也使该系统有可能成为丝状真菌基因组研究的有力工具。本文就根癌农杆菌转化丝状真菌原理、过程、种类、影响转化效率的因素及其应用等方面进行了综述。［关键词］根癌农杆菌；丝状真菌；遗传转化丝状真菌（filame
tousfu
gi是真菌中一个很大类群，通常指那些菌丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。其在自然条件下常引起食物、工农业产品的霉变和植物的真菌病害，在工业、农业、医药及基础生物学研究中具有重要作用。丝状真菌中很多种具有重要的经济价值，还有一些是昆虫、植物、动物和人类的重要致病菌，如绿僵菌（Metarhiziuma
isopliae、稻瘟菌（Mag
aporthegrisea和烟曲霉（Aspergillusfumigatus等。而构巢曲霉（Aspergillus
idula
s和粗糙脉孢霉（Neurosporacrassa由于结构简单，通常［1］被作为真核微生物的“模式”种用于基础研究。由于丝状真菌在经济上和科学中的重要性，多年来一直被广泛地研究。近年来发展了很多转化的方法，但并非所有方法都适用于丝状真菌。以往丝状真菌的常规转化方法有PEG介导的原生质体转化，限制酶介导的插入突变（Restrictio
e
zymemediatedi
sertio
al，REMI等，但是这些转化技术或需要制备原生质体、或转化效率低．阻碍了它们在研究丝状真菌功能基因中的应用。根癌农杆菌介导的转化体系（Agrobacteriumtumefacie
smediatedtra
sformatio
，ATMT克服了这些缺点．为丝状真菌的遗传转化和功能基因研究提供了有力的工具，现已被广泛地运用于丝状真菌的遗传操作目前已经实现了对泡盛曲霉（Aspergilusawamori、粗糙脉孢菌（Neurosporacrassa、尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum和瓜类炭疽（Colletotrichumlage
arium等60多种真［2］菌的遗传转化。
1、根癌农杆菌介导遗传转化的丝状真菌的原理和种类
根癌农杆菌是革兰氏阴性土壤杆菌．自然情况下它可通过伤口侵入植物导致受伤部位产［3］生瘿瘤，并将其TDNA序列转入植物细胞并整合到植物染色体上．利用这一原理得到第一批能表达外源基因的转基因植物。根癌农杆菌正被广泛地应用到植物的遗传转化中。在大［4］肠杆菌与酵母菌能够通过接合的方式将前者的质粒转移到后者和农杆菌转化植物等现象的启下，Bu
dock等人尝试用根癌农杆菌介导酵母菌的遗传转化，发现根癌农杆菌可以转化r