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材料名称及日期,倒转置恒温箱中培养。思考题:方格划线哪个地方会长出单个菌落比较多?
(2)倾注法:不常用,这里不做介绍2)厌氧菌的分离培养方法
厌氧菌生长繁殖的环境不能有游离氧的存在。故在培养厌氧菌时,必须创造一个厌氧环境,一般以降低氧的张力或保持减低的氧张力为原则。目前应用于厌氧菌的分离方法颇多,现就其中较简便且常用的几种方法介绍如下:
(1)焦性没食子酸法利用焦性没食子酸在碱性溶液内能大量地吸收氧的原理进行厌氧培养。通常100cm3空间用焦性没食子酸1g,10氢氧化钠或氢氧化钾10ml。具体方法有下列有平板培养法、干燥器培养法。平板培养法是将厌氧菌划线接种于适宜的琼脂平板,取一小团直径约2cm的脱脂棉,置于平皿盖的内面中央,其上滴加10氢氧化钠溶液约5ml;在靠近脱脂棉的一侧放置焦性没食子酸约05g注意暂勿使两者接触,立即将已接种好的平板覆盖于平皿盖上,迅速用融化的石蜡密封平皿边缘周围。封毕,轻轻摇动平皿,使被氢氧化钠溶液浸湿的脱脂棉与焦性没食子酸接触,然后置37℃恒温箱中培养之。干燥器培养法是于干燥器底部放入氢氧化钠溶液适量,然后再放入23个略高于液面的玻璃圆柱(如链霉素小瓶),将适量焦性没食子酸用纸或纱布包好,放置于圆柱上面,使暂勿与氢氧化钠接触,然后放下隔板,将已接种的培养皿或试管置于隔板上,待一切准备好后,将盖盖好密封,并轻轻摇动干燥器,使焦性没食子酸落入氢氧化钠溶液中。
(2)高层琼脂柱摇震培养分离法

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取长约15cm,直径约5mm的玻璃棒一支,一端塞以小木塞,另一端塞以棉花塞,高压灭菌备用;加热融化一管适合分离厌氧菌用的琼脂培养基,待冷却至50℃左右,接入少许经适当稀释的待分离的培养物或含菌材料,充分摇震均匀;在琼脂凝固前,迅速以无菌滴管吸取上述已接种的琼脂培养基,注入上述(1)准备好的玻璃管内,置恒温箱中培养。
(3)连二亚硫酸钠法将已接种的平板或斜面培养基,置于一玻璃干燥器内(预先测出体积),按每1000ml容积称取连二亚硫酸钠(又称保险粉)和无水碳酸钠各4g,并分别研细均匀,临用前混合置于一平皿内,放在培养基上层,然后将盖盖严,用凡士林密封,置37℃恒温箱中培养。2)二氧化碳培养法少数细菌如布氏杆菌(牛型),在含有10二氧化碳的环境下生长良好。要创造这样的环境,常用的方法为烛缸法。将接种的培养基置玻璃干燥器或其他可以密闭的玻璃缸内,于其内点燃一小段蜡烛,加上盖(盖边涂凡士林以防漏气),约r
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