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几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法r
11常量肉汤稀释法r
111抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μgml如1280μgml或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如:需配制100ml浓度为1280μgml的抗生素贮存液,所用抗生素为粉剂,其药物的有效力为750μgmg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为1826mg。根据公式计算所需稀释剂用量为:(1826mg×750μgml)1280μgml1070ml,然后将1826mg抗生素粉剂溶解于1070ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于60℃以下环境,保存期不超过6个月。r
112药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准,药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值,特殊情况例外。r
113培养基NCCLS推荐使用MuellerHi
to
(MH)肉汤,pH7274。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2(WV)氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含25溶解马血的MH肉汤。r
114接种物的制备有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落35个,接种于45ml的水解酪蛋白(MH)肉汤中,35℃孵育26h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至05麦氏比浊标准,约含12×108CFUml。二是直接菌落悬液配制法,对某些苛养菌,如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养1824h的菌落调配成05麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度。r
115稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管(13×100mm)13支,排成一排,除第1管加入16mlMH肉汤外,其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液(如1280μgml)04ml混匀,然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、05、025μgml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5×105CFUml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、025、0125μgml。r
116孵育将接种好的稀r
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