荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。服务流程1客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；2签订技术服务合同，支付预付款（3050；3设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；4DNARNA的抽提、定量、RNA反转录；5PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；6正式定量实验：对所有样品上机检测；7实验结果和数据分析，形成报告。收费标准优惠包干价：120元样基因（SYBRgree
I法，相对定量）（含RNA提取，反转录，引物合成费用，上机测试费用（3个重复）；一个内参免费（内参3个重复）Ct值（Cyclethreshold，循环阈值）的含义为：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数
（如图1所示）。1荧光阈值（threshold）的设定PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省（默认）设置是315个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold10SDcycle3152Ct值与起始模板的关系每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，公式如下。Ct1lg1ExlgX0lgNlg1Ex
为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：1TaqMa
荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光
f探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基
团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMa
MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。
2SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确r