患者60例年龄21～70岁平均38岁。TCT结果中无上皮内病变或恶性病变NILM10例意义不明的非典型鳞状上皮细胞ASCUS6例低度鳞状上皮内病变LSIL7例高度鳞状上皮内病变HSIL14例宫颈浸润癌SCC23例。采用第2代杂交捕获法HC2行HPVDNA检测FISH法行hTERC基因扩增检测。
12试验方法
121TCT采用美国新柏氏液基细胞学制片技术依照TBS细胞学分级做出诊断。
122高危型HPV检测采用基因杂交捕获HC2法美国DIGENE公司研发进行测定。
123组织病理学阴道镜下组织活检HE染色后镜检提供最终病理诊断结果。
124FISH检测①制片将TCT保存瓶中剩余液体用制片机制成玻片56℃烤片机老化30mi
或室温下过夜老化②消化2×SSC液洗2次5mi
01molLHCL10mi
37℃001molLHCL胃酶10mi
2×SSC液洗2次5mi
③脱水70、85、100乙醇梯度脱水各3mi
自然干燥④变性56℃烤片机加热5mi
70甲酰胺2×SSC液75℃水浴中变性5mi
然后立即20℃乙醇梯度脱水各3mi
自然干燥后46℃烤片机烤干等待杂交⑤杂交将配好的杂交探针CSP7μl、hTERC2μl、去离子水1μl在75℃水浴中变性5mi
然后立即加到玻片上盖上盖玻片封片置于湿盒内将湿盒置于42℃恒温孵箱中过夜杂交⑥洗片将杂交后的玻片置于47℃50甲酰胺2×SSC液10mi
47℃3次10mi
2×SSC液10mi
47℃NP40洗5mi
47℃洗涤完毕后将玻片置于70乙醇中3mi
自然干燥后加15μlDAPI加盖玻片暗处放置10～20mi
⑦阅片荧光显微镜下观察细胞核中红绿荧光信号红色荧光信号为3q263位点目标信号绿色荧光信号为3号染色体着丝粒参照信号。
13FISH判断标准
f龙源期刊网httpwwwqika
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应用hTERC基因双色探针hTERC探针购置于北京金菩嘉医疗科技有限公司为TERCCSP3DNA探针HPV阴性、病理诊断为炎症的宫颈脱落上皮中hTERC基因杂交信号为标准确定。取涂片分别计数100个细胞记录hTERC基因超过2个杂交信号的异常细胞数即细胞中出现绿红
14统计学方法
结果采用SPSS130统计软件进行分析采用χ2检验P
2结果
宫颈脱落细胞标本与TERCCSP3DNA探针杂交后均可清晰地看到红色及绿色的探针杂交信号亮点。
21细胞学结果
NILM者hTERC基因扩增阳性率为0ASCUS者为1667LSIL者为7143HSIL者为9286SCC者为10000。这表明随着宫颈病变级别增加hTERC基因扩增阳性率也逐渐增加hTERC基因扩增在细胞学中存在差异并随着细胞学病变程度的加重而升高χ211111P
22组织病理学结果
正常或炎症者hTERC基因扩增阳性率为0CINⅠ级患者为2000CINⅡ级患者为3333CINⅢ级患者为8824宫颈癌r