胞形态上可分为几大类型成纤维细胞、上皮型细胞、游走细胞型、多形型细胞(拓展题)
f6212悬浮型生长细胞七、细胞生长的特点11.粘附并伸展2.密度依赖性(基础题)八、细胞生长增殖过程1
九、动物细胞培养的主要特点2污染可能概率大营养成分需求高培养环境适应性差培养条件要求严代谢废物毒性大检测控制指标多载体生长依赖强
十、细胞培养的条件与影响因素1101细胞培养的营养
水糖氨基酸维生素无机离子和微量元素血清促细胞生长因子(基础题)
f102影响细胞生长的因素1温度渗透压气体环境和pH无毒和无菌细胞接种密度容器转动速度和悬浮搅动速度(基础题)
103细胞培养无菌无毒环境2实验室、生产车间设计合理常用设施及设备培养器皿:透明度好、无毒、利于细胞贴附和生长的材料。
104常用设备设施(公司细胞毒线)液氮罐及冻存管二氧化碳培养箱及细胞培养瓶转瓶机及转瓶激流灌注式生物反应器(贴壁培养)生物反应器(NBS)(贴壁或悬浮培养)倒置显微镜……(基础题)
105目前生产用最常用的培养基:MEM(传代细胞)、乳汉液(原代细胞)。(基础题)106其它常用液体试剂2PBSHa
k’s液NaHCO3溶液025胰酶溶液EDTA胰酶分散液SPHEPESL谷氨酰胺D氨基葡萄糖
fDMSO……(拓展题)107哺乳动物细胞冷冻保存2主要目的:(拓展题)(1)保存种子细胞,以便随时取用。(2)降低人力和物力。(3)减少细胞被微生物污染的危险性。(4)避免有限细胞系出现衰老或恶性转变。(5)减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。冷冻保存要点:(拓展题)(1)冷冻过程要缓慢,有条件的地方,可用程控降温仪,按每分钟1到3℃速度降温,一直到80℃以下,然后直接放入液氮中长期保存(2)冻存细胞必须处在对数生长期,活力大于90%,无微生物污染。(3)细胞浓度控制在:1×106-1×107ml。(4)使用高浓度血清(2030)(5)使用合适的细胞冷冻保护剂(DMSO、甘油)
细胞冻存慢冻细胞复苏快融(基础题)108不易察觉的细胞污染2真菌污染(拓展题)
真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种,尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后,可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;
倒置显微镜下可见丝状、管状或树r