碱性纤维素酶产生菌的分离和筛选
一．实验目的1了解科学课题研究的一般思路。2初步学会实验方案的设计。3综合培养动手操作能力及创新精神。二实验原理该研究设计性实验是利用纤维素酶产生菌可以分解纤维素酶，故而在含有羧甲基纤维素的平板（pH90）上可形成透明圈的原理分离和筛选碱性纤维素酶产生菌。从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。1、采样：即采集含菌的样品采样：采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多，然后才可着手做各项具体工作。在土壤中几乎各种微生物都可以找到，因而土壤可说是微生物的大本营。在土壤中，数量最多的当推细菌，其次是放线菌，第三霉菌，酵母菌最少。除土壤以外，其他各类物体上都有相应的占优势生长的微生物。例如枯枝、烂叶、腐土和朽木中纤维素分解菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多，果实、蜜饯表面酵母菌较多；蔬菜牛奶中乳酸菌较多，油田、炼油厂附近的土壤中石油分解菌较多等。2、增殖培养（又称丰富培养）增殖培养（又称丰富培养）增殖培养就是在所采集的土壤等含菌样品中加入某些物质，并创造一些有利于待分离微生物生长的其他条件，使能分解利用这类物质的微生物大量繁殖，从而便于我们从其中分离到这类微生物。因此，增殖培养事实上是选择性培养基的一种实际应用。3、纯种分离在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。通过上述的增殖培养只能说我们要分离的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必须进行纯种分离。纯种分离的方法很多，
f主要有：平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。三．实验材料1、器材：器材：小铁铲和无菌纸或袋（可省）、培养皿6个、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、无菌水试管5支（每支45mL水）、烧杯3个、三角瓶5个、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、高温灭菌锅、移液枪（枪头10个）、天平、滤纸、pH试纸等。试剂：2、试剂：配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（营养肉汤18g、CMCNa2g、琼脂2g、无菌水100mL、pH90）01molL的NaOH、01molL的盐酸（调节PH）、、无菌水等。土样：（or红树林）3、土样：清远山泉边的植物林地土壤，地下8cm左右。四．实验方法步骤1、采集土样：带上小铁铲和矿泉水瓶采集较细碎土r