西北农林科技大学食品学院免疫学课件
第八章免疫学技术
第八章免疫学技术
第一节抗原抗体的制备
一、抗原的制备
制备特异性的抗原是制的合格抗体的前提条件，而作为检测诊断的抗原也必须是纯化的抗原。抗原的物质很多，很少是单一成分，必须从复杂的组分中提取分离。按抗原的物理状态，可分为天然抗原、人工抗原和合成抗原三类。
1、天然抗原的制备
（1）颗粒性天然抗原常见的颗粒抗原包括动物、植物、微生物的细胞，和有关的细胞组成结构，如细胞的细胞壁、线粒体，细菌的鞭毛和菌毛等。一般步骤为：首先收集抗原细胞或（和）扩增培养，然后离心或过滤收集细胞或细胞组成结构物，再进行病原微生物灭活。（2）可溶性抗原的分离纯化蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原，免疫前常需纯化。细胞破碎方法有：冻融法；超声破碎；高速组织捣碎机法；研磨法；溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶处理可溶性蛋白抗原的分离方法：离心分离法：差速离心、密度梯度离心选择沉淀法：盐析沉淀法；有机溶剂沉淀法，常采用乙醇或丙酮核酸去除法，DNA酶、RNA酶处理；水溶性非离子型聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物为分子量为2000～6000的聚乙二醇（PEG）凝胶过滤法：又称分子筛层析。通过凝胶分子筛作用，可将大、中、小三类分子分开，选择凝胶柱时应注意选用适于分离范围内的凝胶。离子交换层析法：离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。亲和层析法：亲和层析是利用生物分子间所具有的专一性亲和力而设计的层析技术。如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体、DNA和RNA等之间有特殊亲和力，一定条件下，两者可紧密结合成复合物，如将复合物的一方固定于固相载体上，则可从溶液中分离和提纯另一方。纯化抗原的鉴定主要对纯化抗原的含量、理化性质、纯度及免疫活性进行鉴定，常用方法有酚试剂法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、免疫电泳法、免疫双扩散法等。
2、人工抗原的制备
人工抗原指经过人工修饰的半抗原，即将半抗原与载体连接后形成的完全抗原。小分子半抗原可以是多糖、多肽、核酸、类固醇激素、某些药物及其它化学物品。在食品检验中常见的小分子半抗原有各种农药、兽药、添加剂与非法添加物（盐酸克伦特罗）、真菌毒素等等。常用载体：蛋白质、多肽聚合物、大分子聚合物。
1
f西北农林科技大学食品学院免疫学课件
第八章免疫学技术
r