化学发光免疫分析技术原理简介20世纪60年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。1977年Halma
等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合,创建了化学发光免疫分析法,保留了化学发光的高度灵敏性,又克服了它特异性不足的缺陷。近年来对技术与仪器的不断改进,使此技术已成为一种特异,灵敏,准确的自动化的免疫学检测方法。1996年推出的电化学发光免疫技术,在反应原理上又具有一些新的特点。这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。一、化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法chemilumi
esce
ceimmu
oassayCLlA是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术,既具有发光检测的高度灵敏性,又具有免疫分析法的高度特异性。在CLIA中,主要有两个部分,即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺lumi
ol、异鲁米诺isolumi
ol、金刚烷AMPPD及吖啶酯AE等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物,当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子,随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。将发光物质直接标记于抗原称为化学发光免疫分析或抗体上称为免疫化学发光分析,经氧化剂或催化剂的激发后,即可快速稳定的发光,其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。亦可将氧化剂如碱性磷酸酶等或催化剂标记于抗原或
f抗体上,当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物,再与发光底物反应,其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA在内的传统检测方法,检测范围宽,测试时间短,仅需3060mi
即可。试剂货架寿命长,稳定性好,具有大规模自动化测试的功能。这项技术发展很快,已有许多厂商生产各具特色的测定仪器与配套试剂。目前我国仪器与试剂均需进口,测定成本较高。其反应过程分为以下两个阶段。1待测抗原Ag和一定量的碱性磷酸酶标记抗原ALPAg同时与一定量的特异性抗体Ab竞争结合。ALPAgAb的量与Ag的量之间存有竞争抑制的关系,即Ag的量越多,形成的AgAb的量就越多,ALPAgAb的量越少。反之亦然。2加入羊抗鼠IgG包被的磁性颗粒,捕获ALPAgAb其中的Ab为鼠单克隆抗体,在磁场作用下将ALPAgAb与ALPAg分开,经洗涤并吸弃废液后,加入化学发光底物dioxeta
ephosphateAMPPD,后者为带有二氧四联环稳定结构的化合物,在ALP的作用下去掉磷酸根,r