高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因
高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因含量
一目的要求：
1学习高效液相色谱定性和定量分析的方法；
2熟悉高效液相色谱仪的结构；
3熟悉高效液相色谱分析操作和条件的设置。
二实验原理：
茶叶中咖啡因的含量是衡量茶叶质量的重要指标之一，也具有多种药理活性，咖啡因又
名咖啡碱，属甲基黄嘌呤化合物，具有提神醒脑等刺激中枢神经的作用。对于茶叶中咖啡因
含量测定的常用方法有紫外分光光谱法，高效液相色谱法。茶叶中的成分较多，色谱法具有
分离和检测双重功能，用色谱法更好。目前茶叶中咖啡因含量的测定采用反相高效液相色谱
法较普遍。本实验采用紫外检测器，水提取茶叶中的咖啡碱，用045的滤膜过滤，用
02H3PO4：CH3OH8020流动相，检测波长276
m，用咖啡因对照品的保留时间进行定性，
用外标法定量。
三试剂和仪器：
LC2010AHT高效液相色谱仪日本岛津，自动进样系统和紫外检测器；KQ3200E型超
声波清洗器；045m的水系滤膜和有机滤膜；TDL40B离心机。100mL的容量瓶。
对照品工作溶液为：咖啡碱标样，乙醇；磷酸；纯净水；甲醇；茶叶样品
四茶叶样品的处理
准确称取茶叶样品1g（00001g）于100mL容量瓶，加入约70mL纯净水，在超声波中
超声20mi
，平行3份，定容至100mL。045m的水系滤膜抽滤，取续滤液与比色管（或者
用5000转mi
以上的离心机离心15mi
，取上清液），待用。
五色谱条件（实验时自己记录）
色谱柱：
流动相体系：02磷酸甲醇（体积比为8020）注意：在做样品时用梯度洗涤，咖
啡因出峰后用100CH3OH冲洗78mi
的柱子，再用02磷酸甲醇（体积比为8020）平衡78mi
柱子才能进下一样品
流速：1000mLmi

柱温：300C
进样量：5L
检测波长：276
m
六咖啡因标准曲线绘制和样品测定
用相同浓度的咖啡碱标准溶液，按照下表1中的不同体积进样。
表1进样体积和峰面积
进样体积L
咖啡碱进样质量g
咖啡碱峰面积A
1030
1
f508010050（样品1）50（样品2）50（样品3）
高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡因
用excel回归处理的标准曲线，根据标准曲线计算茶叶溶液中咖啡碱的浓度（gmL1）同时
换算成茶叶中咖啡碱的浓度（mgg1）。
表2茶叶中咖啡碱的数据处理
茶叶质量茶叶溶液体积茶叶溶液中咖啡因浓度咖啡因质量茶叶中咖啡因浓度平均浓度RSD
（g）
mL
（gmL1）
mg）
mgg1
mgg1
七思考题
1怎样调整流动相的比例调整咖啡因的保留时间？2．在高效液相色谱中，为什么可利用保留值r