实验十六丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
【实验名称】：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
09救援一班第三大组李岚宇2009222336室温：25℃
（一）实验目的：1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。
（二）实验原理：化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。
丙二酸的化学结构与琥珀酸相似，它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。（三）实验材料与仪器：
1器材大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管架、恒温水箱、电热水浴锅
2试剂02molL琥珀酸溶液、002molL琥珀酸溶液、02molL丙二酸溶液、002molL丙二酸溶液、115molL磷酸缓冲液、002％甲烯蓝、液体石蜡。
（四）实验步骤1、酶提取液的制备：去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏，用冷水洗3次，加入115molL磷酸缓冲液pH在74。在匀浆器中进行匀浆，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。2、取试管6支，编号，在按图步骤操作，
酶提取液（ml）
磷酸缓冲液（ml）
02molL琥珀酸（滴）
002molL琥珀酸（滴）
02molL丙二酸溶液（滴）
002molL丙二酸溶液（滴）
蒸馏水（滴）
甲烯蓝（滴）
褪色时间（分钟）
试管1
2

8



8
33分33秒
试管2
2

8


8

35分30秒
试管3
2

8

8


36分04秒
试管4
2


8
8


37分28秒
试管5

2
8



8
3
无限大
试管6
2

8



8
3
无限大
试管6，在酶提取液先在100℃的水浴加热煮沸5mi
。各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体石蜡，约05cm，各管置于37℃的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。
（五）实验结果记录：
f试管1试管2试管3试管4试管5试管6
褪色时间（分钟）
3分33秒5分30秒6分04秒7分28秒无限大无限大
IS
001
11000
表1（六）实验讨论：
1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸r