变时间长，最适合用于分辨荧光免疫测定。所需要的仪器：荧光显微镜、显微荧光分光光度计、流式细胞仪和时间分辨荧光计等仪器激光共聚焦显微镜荧光偏振免疫分析用偏振光激发标记物，利用结合竞争免疫原理，可以快速检测激素种瘤标志物、维生素和多种治疗药物浓度。而且用于鉴定的材料也比较多样，可以是培养物、感染组织、分泌排泄物，也可以是土壤、水、杂物等。应用于生物酶含量及活性测定、临床医学检验、食品分析和环境监测、毒品检验。选择荧光素主要考虑以下几点：①高消光系数（exti
ctio
coefficie
t）和光子产量（Qua
tumyield），这意味着光捕获能力强和效率高；②光稳定性较好；③与常见光源和滤光器匹配性较好；④不干扰抗体反映；⑤水溶性以及pH稳定性。此外，还需要考虑到是否有毒性以及荧光素的颜色是否与背景颜色反差大对比鲜明等。
三荧光技术平台介绍
1时间分辨荧光免疫测定
以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰，以及激发光源的杂射光的影响，使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定
f（timeresolvedfluoresce
ceimmu
oassay，TRFIA）是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。TRFIA的测定原理见图174。以双抗体夹心法为例的测定反应程序见图175。其中增强液的作用是使荧光信号增强。因为免疫反应完成后，生成的抗原－抗体－铕标记物复合物在弱碱性溶液中，经激发后所产生的荧光信号甚弱。在增强液中可至pH2～3，铕离子很容易解离出来，并与增强液中的β二酮体生成带有强烈荧光的新的铕螯合物，大大有利于荧光测量。所用检测仪器为时间分辨荧光计，与一般的荧光分光光度计不同，采用脉冲光源（每秒闪烁1000次的氙灯），照射样品后即短暂熄灭，以电子设备控制延缓时间，待非特异本底荧光衰退后，再测定样品发出的长镧系荧光。检测灵敏度可达02～1
gml。
2解离增强镧系元素荧光免疫分析
解离增强镧系元素荧光免疫分析（Dissociatio
E
ha
cedLa
tha
ideFluoroimmu
oassayDELFIA）是时间分辨荧光免疫分析中的一种。它用具有双功能基团结构的螯合剂，使其一端与铕（Eu）连接，另一端与抗体抗原分子上的自由氨基连接，形成EU标记的经过免疫反应之后生成免疫复合物r