AAV病毒包装摘要一AAV293细胞的冻存二AAV293细胞的传代三AAV293细胞的复苏四AAV包装和浓缩一AAV293细胞的冻存随着传代的次数增加，AAV293细胞会出现生长状态下降、突变等。为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。1、去掉细胞培养上清液，加入PBS洗去残留的培养基2、加入025的胰酶，消化12mi
后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入3mL37℃预热的10DMEM，用10mL移液管进行吹打，较大力吹打68次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL离心管中，取50ul混匀后的细胞于15mLeppe
dorf管中，加入450ul10DMEM，即为10倍稀释，混匀，取10ul细胞于计数板中计数。计数板上共4大格，每大格16小格。计数时，4大格均计数，总数除以4得每大格细胞数，再乘以1010倍稀释，即为实际
万mL细胞浓度。4、细胞离心，1000rpmmi
，5mi
。去掉上清。5、根据细胞计数结果加入细胞冻存液70完全培养基20FBS10DMSO重悬细胞，密度为3x106个ml。6、分装进细胞冻存管，放入冻存盒中，放入80℃超低温冰箱。7、第二天将细胞放于液氮罐中长久保存，并作记录。保存过程中，要不时复苏细胞检测细胞存活率，观察细胞状态等。二AAV293细胞的传代当细胞生长到汇合率达到8090时需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好的生长状态。1、消化细胞，方法同细胞冻存。2、细胞离心结束后，加入完全培养基重悬。3、根据具体情况，将细胞分到10cm培养皿中，每个培养皿补足到10ml培养基。三AAV293细胞的复苏当细胞传代次数过多，细胞状态变差时，或者细胞出现污染事故时，需要丢弃并对最初冻存的细胞进行复苏。1、设置温度为3742℃的水浴。2、查看细胞库记录，根据记录从液氮罐中取出冻存的细胞需戴上棉手套，防止被冻伤，迅速丢入水浴锅中并快速晃动，尽量在12mi
内使细胞溶液完全溶解。3、将细胞溶液转移到15ml离心管中，并在其中加上1ml新鲜的完全培养基，混匀后离心，1000rpmmi
，5mi
。4、去掉上清，加入5ml新鲜的完全培养基，混匀沉淀后，转入6cm培养皿。5、将培养皿平稳放入37℃、5CO2和95相对湿度的培养箱中培养。6、第二天观察细胞存活率。给细胞换一下培养基。以后每天观察细胞生长情况。四AAV包装和浓缩1质粒扩增构建好的AAVr